Berkaitan dengan penyiapan pukal RNA secara berperingkat, kaedah yang biasa digunakan adalah transkripsi in vitro (IVT). Tindak balas IVT menggunakan DNA plasmid yang diluruskan yang mengandungi promotor T7 sebagai templat dan menyintesis pukal RNA dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dalam kehadiran polimerase RNA T7.
Kaedah-kaedah cyclization in vitro termasuk ligasi kimia, ligasi enzimatik dan kaedah intron-exon bertukar (PIE). Ligasi kimia dan ligasi enzimatik sesuai untuk cyclization RNA yang lebih pendek. Apabila fragmen lebih besar daripada 100 nt, kadar cyclization akan menurun secara ketara. Sebaliknya, kaedah nuclease berasaskan sistem PIE boleh mencapai cyclization urutan 8 kb.
Di bawah katalisis guanosin trifosfat (GTP), struktur PIE mengalami siklitisasi urutan intra tambahan. Dengan strategi yang munasabah untuk meningkatkan kadar siklitisasi, Yaohai Bio-Pharma boleh mencapai siklitisasi hingga 4 kb urutan, dengan kecekapan siklitisasi lebih daripada 80%.
Tindak balas siklitisasi in vitro RNA berjalan seperti berikut:
Precursor RNA diperngarakan melalui transkripsi in vitro, dan komponen PIE menyelesaikan self-splicing di bawah katalisis GTP untuk membentuk circRNA.
Butiran Perkhidmatan
| Proses |
Butiran Perkhidmatan |
Tempoh Penghantaran (hari kerja) |
| Transkripsi in vitro dan Peredaran |
Pengesahan sistem tindak balas |
1-2 |
| Tindak Balas Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi |
| Pencernaan RNase R |
| Optimasi tindak balas |
Komposisi Tindak Balas, Pengoptimuman Masa |
2-5 |
Ciri-ciri Kami
- Reka bentuk ujian yang ketat dan pengoptimuman
Hingga 4 kb RNA siklis boleh dicapai.
Kadar sikelan lebih daripada 80% boleh dicapai melalui strategi pengoptimuman urutan yang rasional.
- Kawalan ketat terhadap RNase
Melalui kawalan ketat RNases dalam persekitaran eksperimen dan peralatan habis guna, penguraian RNA dipencegah dengan berkesan.
Kajian Kes
Sikelan dan peningkatan circRNA in vitro
Berdasarkan sistem PIE, Yaohai Bio-Pharma telah mengoptimumkan urutan circRNA, dengan kadar sikelan lebih daripada 80% oleh elektroforesis gel agarosa (AGE). Menggunakan RNase R untuk memperkaya circRNA, hasil elektroforesis E-gel menunjukkan bahawa prekursor RNA linear tercerna, dan selepas pemurnian lanjut, kebanyakan circRNA yang terbelah boleh dikeluarkan. Larutan pemurnian dikembangkan sendiri oleh Yaohai Bio-Pharma.
Peredaran dan peningkatan circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
