Kepentingan Pembangunan Proses Hulu
Proses hulu (USP), juga dikenali sebagai proses penapaian, merupakan salah satu fasa awal dalam biopemprosesan hulu. Proses penapaian mikrobia penting untuk budidaya sel kepadatan tinggi dan ungkapan gen luaran, yang secara langsung mempengaruhi hasil dan kos produk biologi.
Pada peringkat awal pembangunan produk biologi (pra-klinik atau fasa 1/2), tumpuan adalah untuk membina proses bebas haiwan yang boleh diperbesar dengan hasil sederhana dan mematuhi semua piawaian kualiti produk.
Manakala pada peringkat akhir (fasa 3 atau komersial), kami akan berkonsentrasi pada hasil, ketahanan, skala besar, dan kebolehulangan, menghasilkan proses yang cekap dari segi kos. Aktiviti yang menyelesaikan isu-isu ini adalah pengiktirafan proses dan kajian pengesahan proses. Pada masa yang sama, alat kualiti oleh rancangan (QbD) dan reka bentuk eksperimen (DoE) biasanya digunakan.
Kata kunci: pembangunan proses, optimasi, dan pengesahan, proses fermentasi, fermentasi sel mikrob, fermentasi bakteria, fermentasi ragi, fermentasi ketumpatan tinggi, fermentasi strain direka
Aplikasi: industri bi farmaseutikal, ubat manusia, ubat haiwan, vaksin, produk biologi molekul besar rekabentuk, produk biologi rekabentuk, bahan biologi
Penyelesaian USP Yaohai Bio-Pharma
Dengan faedah lebih 10 tahun pengalaman dalam fermentasi mikrob, Yaohai Bio-Pharma mempunyai kecekapan untuk membantu menyelesaikan cabaran proses fermentasi. Kami boleh dengan pantas membina strategi fermentasi ketumpatan tinggi untuk Escherichia coli (E. coli) pengekskresian perisem, kelarutan intrasel atau ungkapan badan termasuk, dan ungkapan ekstrasel atau intrasel Ragiu.
Perkhidmatan pembangunan fermentasi am yang tersedia termasuk:
- Reka bentuk proses fermentasi dilakukan pada skala kecil 7L dalam mod pemberian terus
- Pengesahan proses tiga-batch dalam penapis fermentasi 7L
- Proses penskalaan perantara kepada 30L/70L
Kami boleh fleksibel melaksanakan pengoptimuman multi-parameter untuk memenuhi hasil atau nisbah yang diingini, menggunakan One-Time-A-Factor (OTAF) atau Design-of-experiments (DoE).
Parameter utama penapaian adalah seperti berikut:
Komposisi media penapaian bebas haiwan
Bebas antibiotik atau tidak, Isipadu Inoculum
Suhu pertumbuhan, pH, aras Oksigen Terlarut (DO)
Mod pemberian (contohnya, fed-batch)
Ketumpatan pencetus (contohnya, IPTG, metanol), Titik pencetusan (berat basah sel/OD600),
Suhu pencetusan, Masa pencetusan
dll.
Butiran Perkhidmatan
| Perkhidmatan |
Aliran proses |
| Penanaman dalam Sekap Botol (500 mL) |
Persiapan media bebas haiwan → Penanaman bij microbial → Penanaman dalam penjajar → Induksi → Panen |
| Penanaman dalam Fermenter (7 L) |
Persiapan media bebas haiwan → Penanaman bij microbial → Fermentasi sel rapat dalam bioreaktor 7L → Induksi → Panen |
| Kawalan Kualiti Protein/Peptida |
Pra-pengilangan Ungkapan larutan intrasel: Penenapan sel mikrobial dan pengecaminan semula → Pemecahan ultrasonik → Pengalihan sisa sel → Ekstrak kasar Ungkapan badan termasuk: Penenapan sel mikrobial dan pengecaminan semula → Pemecahan ultrasonik → Penyediaan badan termasuk → Ekstrak kasar Ungkapan larutan luaran: Pengumpulan supernatan budidaya → Pengumpulan dan pertukaran buffer → Ekstrak kasar Analisis kualiti Ekstrak kasar sebagai sampel → Analisis protein sasaran dengan SDS PAGE atau Western blotting (WB) |
| Kawalan Kualiti Plasmid |
Praperlakuan dan Analisis Kualiti → Pengekstrakan plasmid → Analisis DNA oleh elektroforesis gel agarosa |
Kajian Kes
Kami diberi tugasan oleh pelanggan kami untuk meningkatkan hasil hormon polipeptida sasaran dari 8 g/L kepada 10 g/L.
Berdasarkan Reka Bentuk Faktorial Penuh dan Reka Bentuk Permukaan Jawapan dalam alat-alat DoE, kami dengan pantas mengenalpasti dan mengoptimumkan parameter-parameter penapaian utama. Dibawah proses penapaian ketumpatan sel tinggi yang telah dioptimumkan, tahap ungkapan meningkat kepada 10 g/L.
Pengalaman kami
- Kami telah bekerja dengan pelbagai jenis hos mikrob, contohnya, E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) dan Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Kami berpengalaman dengan E. coli pengekskresian periplasmik, ungkapan larut dan badan inklusi, serta ungkapan intraseluler atau ekstraseluler dalam ragi. Hasil badan inklusi boleh mencapai sehingga 10g/L, manakala hasil protein larut berkisar antara 0.5 hingga 15g/L.
- Kami telah terlibat dalam pembangunan dan pengeluaran pelbagai molekul besar, termasuk vaksin subunit rekombinan, partikel serupa virus (VLPs), hormon (insulin, GLP-1, hormon pertumbuhan), sitokina (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), faktor pertumbuhan (EGF, FGF, NGF), nanobodies/antibodi domain tunggal (sdAbs), enzim, dll.
- Peralatan
sistem Penapaian 7L*16
Penalisis Cedex Bio, Penalisis Bioproses
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
