Data pemetaan peptide berdasarkan Kromatografi Likuid-Spektrometri Massa (LC-MS) akan memberikan banyak maklumat mengenai struktur asas dan peringkat yang lebih tinggi bagi protein asli dan rekombinan, termasuk keluasan urutan asid amino, pengubahsuaian pasca-translasi (PTMs, contohnya, glikosilasi, oksidasi, deamidasi), ikatan disulfida, dll.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan perkhidmatan analisis pemetaan peptide untuk protein sasaran anda dengan LC-MS, untuk mempercepatkan penyelidikan anda tentang struktur protein.
Kami telah terlibat dalam Penakrifan Struktur Protein bagi pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi Single-domain (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptide, Sitokina, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Kebutuhan Peraturan untuk Pemetaan Peptide
Panduan ICHQ6B mencadangkan, “Pemecahan pilih atas produk kepada peptida terasing dilakukan menggunakan enzim atau bahan kimia yang sesuai dan peptida pecahan yang dihasilkan dianalisis dengan HPLC atau prosedur analisis lain yang sesuai. Peptida pecahan harus dikenal pasti sejauh mungkin menggunakan teknik seperti analisis komposisi amino asid, penjenisan N-terminal atau spektrometri jisim (MS). Pemetaan peptida bagi bahan aktif atau produk ubat (DP) menggunakan kaedah yang telah divalidasi dengan sewajarnya adalah satu kaedah yang kerap digunakan untuk mengesahkan struktur produk yang diingini untuk keluaran batch.”
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Pemetaan Peptida |
Pencernaan Protease dan Kromatografi Cecair-Spektrometri Jisim (LC-MS) |
Prosedur Analisis
1. Pengurangan dan Penalkilan
Tujuannya adalah untuk mengurangkan jambatan disulfida dan memblokkan tiol bebas yang terhasil. Pengurangan jambatan disulfida membantu membuka struktur protein, yang menjadikan pencernaan proteolitik lebih cekap. Langkah ini juga akan memutuskan jambatan antara rantai dalam kes protein berbilang rantai yang mempunyai jambatan disulfida yang menyambungkan rantai-rantai tersebut (contohnya, antibodi monoklonal, mAbs).
pencernaan Protein Menggunakan Enzim
Tujuannya adalah untuk memecah protein kepada peptida. Kami memilih enzim berdasarkan urutan teoritis protein dan pengetahuan tentang pencernaan teoritis protein oleh enzim. Memilih enzim dengan cara ini, seharusnya menghasilkan analisis peta peptida terbaik.
analisis Peptida yang Telah Dicerna Menggunakan Cromatografi Fasa Songsang-Tinggi Prestasi Berperingkat dengan Pengecaman Ultraviolet (UV) dan Spektrometri Jisim Electrospray (LC/ES-MS).
Pemisahan peptida berdasarkan polariti menggunakan LC (fasa songsang-LC)
Apabila peptida terelut dari kolom LC, spektrometer jisim akan menghasilkan maklumat jisim bersamaan dengan maklumat ion fragmen, yang membolehkan kita menentukan maklumat urutan. Kami menggunakan maklumat urutan untuk mengesahkan identiti peptida dan memberi maklumat asas.
Kami juga boleh menghasilkan maklumat fragmen daripada peptida ketika ia memasuki sumber spektrometer jisim dari kolom LC. Bergantung kepada keperluan kajian, ini adalah sama ada LC-MS/MS pilihan atau bukan pilihan, yang boleh dianggap sebagai satu bentuk MS berperingkat.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
