Data pemetaan peptida berasaskan Kromatografi Cecair-Spektrometri Jisim (LC-MS) akan memberikan sejumlah besar maklumat tentang struktur tertib primer dan lebih tinggi bagi protein asli dan rekombinan, termasuk liputan jujukan asid amino, pengubahsuaian selepas terjemahan (PTM, cth, glikosilasi , pengoksidaan, deamidasi), ikatan disulfida, dsb.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan perkhidmatan analisis pemetaan peptida untuk protein sasaran anda oleh LC-MS, untuk mempercepatkan penyelidikan anda tentang struktur protein.
Kami telah terlibat dalam Pencirian Struktur Protein pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dan lain-lain.
Keperluan Kawal Selia untuk Pemetaan Peptida
Garis panduan ICHQ6B mengesyorkan, “Pemecahan selektif produk kepada peptida diskret dilakukan menggunakan enzim atau bahan kimia yang sesuai dan serpihan peptida yang terhasil dianalisis oleh HPLC atau prosedur analisis lain yang sesuai. Serpihan peptida harus dikenal pasti sejauh mungkin menggunakan teknik seperti analisis komposisi asid amino, penjujukan N-terminal atau spektrometri jisim (MS). Pemetaan peptida bahan aktif atau produk ubat (DP) menggunakan kaedah yang disahkan dengan sewajarnya ialah kaedah yang sering digunakan untuk mengesahkan struktur produk yang diingini untuk keluaran kelompok.”
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Pemetaan Peptida |
Pencernaan Protease dan Kromatografi Cecair-Spektrometri Jisim (LC-MS) |
Prosedur Analisis
1. Pengurangan dan Alkilasi
Tujuannya adalah untuk mengurangkan jambatan disulfida dan menyekat tiol bebas yang dihasilkan. Pengurangan jambatan disulfida membantu membuka struktur protein yang menjadikan pencernaan proteolitik lebih cekap. Langkah ini juga akan memecahkan jambatan antara rantai dalam kes protein berbilang rantai yang mempunyai jambatan disulfida yang menghubungkan rantai (cth antibodi monoklonal，mAbs).
2. Pencernaan Protein Menggunakan Enzim
Tujuannya adalah untuk memecahkan protein menjadi peptida. Kami memilih enzim berdasarkan urutan teori protein dan pengetahuan penghadaman teori protein oleh enzim. Memilih enzim dengan cara ini, harus menghasilkan analisis pemetaan peptida terbaik.
3. Analisis Peptida yang Dicerna Menggunakan Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi Fasa Songsang Dalam Talian dengan Ultraviolet (UV) dan Pengesanan Spektrometrik Jisim Electrospray (LC/ES-MS).
Pengasingan peptida berdasarkan kekutuban menggunakan LC (fasa terbalik-LC)
Apabila peptida mengelus daripada lajur LC, spektrometer jisim akan menjana maklumat jisim bersama-sama dengan maklumat ion serpihan, yang membolehkan kita menentukan maklumat jujukan. Kami menggunakan maklumat jujukan untuk mengesahkan identiti peptida dan memberikan maklumat utama.
Kami juga boleh menjana maklumat pemecahan daripada peptida apabila ia memasuki sumber spektrometer jisim dari lajur LC. Bergantung kepada keperluan kajian, ini adalah sama ada LC-MS/MS terpilih atau bukan selektif, yang boleh dianggap sebagai bentuk MS tandem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
