Berkaitan dengan pengeluaran besar mRNA, transkripsi in vitro (IVT) adalah kaedah yang lebih cekap dan matang. Tindak balas IVT menggunakan plasmid DNA yang linear yang mengandungi penerbit T7 sebagai templat, dan mRNA disintesis dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dalam kehadiran polimerase RNA T7.
Pemodifikasian nukleotida adalah terobosan dalam penyiasatan mRNA, di mana molekul mRNA yang tidak dimodifikasi dikenal pasti oleh sensor RNA intrasel untuk mengaktifkan imuniti bawaan. Untuk pertimbangan imunogenikiti mRNA dalam badan dan kecekapan translasi, proses IVT biasanya menggunakan beberapa jenis NTP yang dimodifikasi, dan nukleotida yang dimodifikasi biasa adalah pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ), dan 5-methylcytosine (5mC).
Proses Transkripsi In Vitro mRNA
Rajah tindak balas transkripsi in vitro (IVT)
Butiran Perkhidmatan
Perkhidmatan Pilihan |
Butiran Perkhidmatan |
Tempoh Penghantaran (hari kerja) |
Transkripsi in vitro (IVT) |
IVT, Transkripsi in vitro |
1 |
| Pemodifikasian nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, dll.) |
| Pembuangan templat DNA (DNase I) |
Penyempurnaan keadaan IVT - pilihan |
Reka bentuk dan penyempurnaan komponen tindak balas IVT |
2-5 |
Ciri-ciri Kami
- Kaedah Pemodifikasian Nukleotida yang Berpelbagai
Memperbaiki kestabilan mRNA dan ungkapan protein dalam badan.
- Reka bentuk ujian yang ketat dan pengoptimuman
persediaan pecahan mRNA hingga 10kb boleh dicapai.
Dengan mengoptimalkan keadaan tindak balas IVT, kadar transkripsi adalah sehingga 1:200.
- Kawalan ketat terhadap RNase
Kawalan tegas terhadap RNase melalui persekitaran eksperimen dan bahan haba boleh secara berkesan mencegah degradasi mRNA.
Kajian Kes
Sistem tindak balas IVT semasa ini telah dioptimalkan secara kasar untuk sistem sintetik dengan panjang kira-kira 100 nt, bukan untuk mRNA dengan panjang sewenang-wenang. Semakin panjang urutan mRNA, semakin sukar untuk ditranskrip dan semakin rentan kepada degradasi.
Untuk menyediakan urutan mRNA yang disesuaikan dengan panjang kira-kira 10 kb, Yaohai Bio-Pharma telah berjaya menyediakan sampel berkualiti tinggi dengan nisbah transkripsi tinggi 1:135 dan memperoleh 135 μg produk mRNA yang telah dipurifikasi awal selepas 1 μg plasmid linear diterjemahkan secara in vitro melalui reka bentuk eksperimen yang ketat, pengoptimuman berterusan keadaan tindak balas, dan kawalan tegas terhadap RNase.
pengenalan mRNA (Elektroforesis Gel Agarose)
MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
BE
MK
UR
BN
