Sintesis In Vitro mRNA
Komponen utama mRNA ialah 5'-cap, 5'-UTR, bingkai bacaan terbuka (ORF), 5'-UTR, dan 5' poli A ekor, yang penting untuk mengekalkan fungsi mRNA. Penyelidik telah menggunakan pelbagai kaedah untuk mengenal pasti dan mengoptimumkan jujukan dan struktur mRNA.
Sintesis mRNA dilakukan berdasarkan transkrip in vitro (IVT) menggunakan templat DNA linear, polimerase RNA (T3, T7, atau SP6), nukleotida yang tidak diubah suai atau diubah suai, enzim dan reagen yang sesuai.
Pengubahsuaian Cap 5'
Urutan mRNA matang daripada eukariosit menunjukkan penutup 7-metilguanosin (m7G) pada hujung 5', yang meningkatkan kestabilan mRNA dan kecekapan translasi. Terdapat dua kaedah umum untuk menangkap mRNA secara in vitro. Pertama, mRNA boleh dihadkan bersama-sama dengan transkrip in vitro dengan menambahkan analog topi struktur m7GpppG (cth, CleanCap) ke sistem IVT. Kaedah capping co-transcriptional ini menyediakan struktur kapsul 5' semula jadi dan meningkatkan kecekapan capping kepada hampir 90-99%. Kedua, pemetaan mRNA juga boleh dicapai dengan memetakan tindak balas enzim berikutan tindak balas transkripsi in vitro.
Pengubahsuaian PolyA
Ekor Poly(A) juga memanjangkan separuh hayat mRNA dalam vivo dan meningkatkan kecekapan terjemahan mRNA. Panjang ekor poli(A) yang dikuatkan hendaklah 100-300 nukleotida. Selain itu, adenosin yang diubah suai meningkatkan kestabilan ekor poli A terhadap degradasi RNase selular. Ekor Poli A boleh dimasukkan melalui transkripsi in vitro menggunakan pengekodan templat DNA poli A, dengan itu menghasilkan panjang jujukan poli A tertentu. Polimerase poli rekombinan juga boleh digunakan oleh poliadenilasi enzimatik selepas transkripsi mRNA.
Pengubahsuaian Nukleotida
Nukleosida yang diubah suai boleh menghalang pengecaman dan/atau pengaktifan reseptor pengecaman corak (PRR) dan meningkatkan keberkesanan vaksin mRNA dalam dua cara yang sama sekali berbeza. Penambahan nukleosida tertentu yang diubah suai secara kimia termasuk pseudouridine (ψ), 1-methylpseudouridine (m1ψ), thiouridine (s4U) dan 5-methylcytosine (m5C) boleh menghalang pengaktifan TLR7/8 dan reseptor imun semula jadi yang lain, yang mengurangkan imunogenik dengan ketara. daripada mRNA.
Sistem Penghantaran mRNA
Untuk mengekalkan fungsi mRNA, ia perlu memasuki sitoplasma tuan rumah dan menyatakan antigen tertentu. Salah satu cabaran paling sukar yang dihadapi oleh vaksin dan terapeutik mRNA terletak pada penghantaran mRNA ke dalam sel sasaran dengan tahap terjemahan yang cukup tinggi kerana ia memerlukan sistem penyampaian mRNA yang sangat spesifik dan cekap. Beberapa vektor penghantaran mRNA telah dibangunkan dan digunakan, termasuk sel dendritik (DC), protamin, polimer kationik, dan liposom kationik.
Kompleks lipid kationik dengan mRNA dan sediaan lain secara kolektif boleh membentuk nanozarah bersaiz 80-200 nm yang dinamakan lipid nanopartikel (LNPs). Sebagai salah satu sistem penyampaian mRNA yang paling maju, LNP termasuk lipid kationik boleh terion, fosfolipid semula jadi, kolesterol dan polietilena glikol (PEG). Beberapa vaksin dan terapi RNA (siRNA dan mRNA) yang diluluskan oleh Pentadbiran Makanan dan Ubat-ubatan AS adalah berdasarkan sistem penghantaran LNP.
Yaohai Bio-Pharma Menawarkan Penyelesaian Sehenti untuk RNA
Boleh Hantar Tersuai
|
Gred
|
Deliverables
|
spesifikasi
|
Aplikasi
|
|
bukan GMP
|
Bahan Dadah, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Penyelidikan praklinikal seperti pemindahan sel, Pembangunan kaedah analisis, Kajian pra-kestabilan, Pembangunan rumusan
|
|
Produk Ubat, LNP-mRNA
|
|
GMP, Kemandulan
|
Bahan Dadah, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Ubat baharu penyiasatan (IND), Keizinan percubaan klinikal (CTA), Bekalan percubaan klinikal, Permohonan lesen biologi (BLA), Bekalan komersial
|
|
Produk Ubat, LNP-mRNA
|
5000 vial atau picagari/kartrij pra-isi
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
