MRNS in vitro sintēze
Galvenās mRNS sastāvdaļas ir 5'-cap, 5'-UTR, atvērtais lasīšanas rāmis (ORF), 5'-UTR un 5'-poli A aste, kas ir būtiski mRNS funkcijas uzturēšanai. Pētnieki ir izmantojuši dažādas metodes, lai identificētu un optimizētu mRNS sekvences un struktūras.
MRNS sintēze tiek veikta, pamatojoties uz in vitro transkriptu (IVT), izmantojot lineāras DNS veidnes, RNS polimerāzes (T3, T7 vai SP6), nemodificētus vai modificētus nukleotīdus, fermentus un atbilstošus reaģentus.
5' vāciņa modifikācija
No eikariocītu nobriedušas mRNS sekvences parāda 7-metilguanozīna (m7G) vāciņu 5' galā, kas uzlabo mRNS stabilitāti un translācijas efektivitāti. Ir divas vispārīgas metodes mRNS uztveršanai in vitro. Pirmkārt, mRNS var noslēgt kopā ar in vitro transkriptu, pievienojot IVT sistēmai m7GpppG struktūras vāciņa analogu (piemēram, CleanCap). Šī koptranskripcijas ierobežošanas metode nodrošina dabisku 5' kapsulas struktūru un palielina vāciņa efektivitāti līdz gandrīz 90–99%. Otrkārt, mRNS kartēšanu var veikt arī, kartējot fermentu reakcijas pēc in vitro transkripcijas reakcijas.
PolyA modifikācija
Poli (A) aste arī pagarina mRNS pussabrukšanas periodu in vivo un uzlabo mRNS translācijas efektivitāti. Pastiprinātās poli(A) astes garumam jābūt 100-300 nukleotīdiem. Turklāt modificēts adenozīns palielina poli A astes stabilitāti pret šūnu RNāzes degradāciju. Poli A asti var ievietot ar in vitro transkripciju, izmantojot DNS veidni, kas kodē poli A, tādējādi iegūstot noteiktu poli A sekvences garumu. Rekombinanto poli A polimerāzi var izmantot arī fermentatīvā poliadenilācijā pēc mRNS transkripcijas.
Nukleotīdu modifikācija
Modificēti nukleozīdi var kavēt modeļa atpazīšanas receptoru (PRR) atpazīšanu un/vai aktivāciju un uzlabot mRNS vakcīnu efektivitāti divos pilnīgi atšķirīgos veidos. Dažu ķīmiski modificētu nukleozīdu, tostarp pseidouridīna (ψ), 1-metilpseidouridīna (m1ψ), tiouridīna (s4U) un 5-metilcitozīna (m5C) pievienošana var novērst TLR7/8 un citu iedzimtu imūnreceptoru aktivāciju, kas būtiski samazina imunogenitāti. mRNS.
mRNS piegādes sistēma
Lai saglabātu mRNS funkciju, tai jāiekļūst saimnieka citoplazmā un jāizpaužas specifiski antigēni. Viens no sarežģītākajiem izaicinājumiem, ar ko saskaras mRNS vakcīnas un terapija, ir mRNS ievadīšana mērķa šūnās ar pietiekami augstu translācijas līmeni, jo tai ir nepieciešamas ļoti specifiskas un efektīvas mRNS piegādes sistēmas. Ir izstrādāti un izmantoti vairāki mRNS piegādes vektori, tostarp dendrītiskās šūnas (DC), protamīns, katjonu polimēri un katjonu liposomas.
Katjonu lipīdu kompleksi ar mRNS un citiem preparātiem kopā var veidot 80–200 nm izmēra nanodaļiņas, ko sauc par lipīdu nanodaļiņām (LNP). Kā viena no vismodernākajām mRNS piegādes sistēmām LNP ietver jonizējamus katjonu lipīdus, dabiskos fosfolipīdus, holesterīnu un polietilēnglikolu (PEG). Vairākas RNS vakcīnas un terapijas (siRNS un mRNS), ko apstiprinājusi ASV Pārtikas un zāļu pārvalde, ir balstītas uz LNP piegādes sistēmām.
Yaohai Bio-Pharma piedāvā vienas pieturas risinājumu RNS
Pielāgoti piegādes materiāli
|
Pakāpe
|
Piegādes
|
specifikācija
|
Aplikācijas
|
|
nav GMP
|
Zāļu viela, mRNS
|
0.1–10 mg (mRNS)
|
Preklīniskie pētījumi, piemēram, šūnu transfekcija, analītisko metožu izstrāde, pirmsstabilitātes pētījumi, preparātu izstrāde
|
|
Zāļu produkts, LNP-mRNS
|
|
GMP, sterilitāte
|
Zāļu viela, mRNS
|
10 mg ~ 70 g
|
Jaunas pētnieciskās zāles (IND), klīniskās izpētes atļauja (CTA), klīnisko pētījumu piegāde, bioloģiskās licences pieteikums (BLA), komerciāls piegādes
|
|
Zāļu produkts, LNP-mRNS
|
5000 flakonu vai pilnšļirču/kārtridžu
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
