الإنزيمات الرئيسية لإنتاج RNA الطويل
المRNA، كنوع من RNA الترميزية الطويلة، أظهرت أمانًا وكفاءة أثناء جائحة COVID-19 في نطاق أوسع من الناس. كما أظهرت أنواع أخرى من RNA الترميزية الطويلة، مثل RNA الذاتي التضخيم (saRNA) وmRNA الدائرية (circRNA)، الكفاءة في الدراسات السريرية ما قبل التجريبية والتجريبية.
إنتاج RNA الترميزية الطويلة على نطاق واسع يعتمد على النسخ الظاهري (IVT) بواسطة عدة تفاعلات إنزيمية. تتضمن خطوات إنتاج RNA إعداد DNA القالب، تكوين RNA عن طريق IVT، الدوران، إزالة DNA، تعديل RNA (التغطية وإضافة الذيل)، وتنقية RNA.
هناك عدة إنزيمات رئيسية تُستخدم في إنتاج RNA الترميزية الطويلة (مثل mRNA، saRNA، و circRNA)، بما في ذلك إنزيمات قص العناقيد النووية المقيدة، بوليمراز RNA T7 (T7 RNAP)، مثبط RNase، فوسفاطاز ثنائي الفوسفات غير العضوي، DNase I، إنزيم الغطاء الفاكسيني، وRNase R.
العملية
|
إنزيم
|
وظيفة
|
إعداد DNA القالب
|
إنزيمات القطع المحدود
|
تعميد الحمض النووي الريبي الدائري (pDNA) لتجنب إنشاء نسخ طويلة.
|
합 تخليق RNA في المختبر (IVT)
|
T7 RNA polymerase (T7 RNAP)
|
الارتباط بمحفز T7 وإنتاج النسخة الخاصة بالRNA؛ تلعب دورًا رئيسيًا أثناء استجابة IVT.
|
مثبط إنزيم RNase، مُعاد تشكيله
|
منع نشاط إنزيم RNase أثناء تفاعل IVT.
|
Pyrophosphatase، inorganic (iPPase)
|
منع البيروفوسفات أثناء تفاعل IVT.
|
إزالة الحمض النووي
|
إنزيم DNase I
|
إزالة القالب الوراثي DNA.
|
تعديل RNA
|
إنزيم Vaccinia capping
|
أضف بنية Cap1 إلى أطراف 5′ من mRNA المُنتج بواسطة IVT.
|
إنزيم نقل ميثيل 2'-O
|
تخصيص circRNA |
ر ر ر |
هضم RNA الخطي وزيادة تركيز RNA الدائري. |
Yaohai Bio-Pharma يقدم حل CDMO الشامل لأنزيمات