يقوم الرنا المرسال (mRNA) المضخم ذاتيًا (saRNA)، والمعروف أيضًا باسم Replicon RNA، بتشفير تسلسلات الرنا المرسال (mRNA) في النسخ المختبري (IVT) وجينات النسخ الفيروسي المشتقة من فيروسات ألفا أو الفيروسات المصفرة. تسمح جينات النسخ الفيروسي بالتضخيم الذاتي للرنا المرسال، مما يؤدي إلى زيادة التعبير البروتيني والحد الأدنى من الجرعة المطلوبة من الحمض النووي الريبي (RNA) مقارنة بالرنا المرسال غير المضخم. جانب آخر هو أن السارنا جزيء كبير نسبيًا (أكثر من 14 كيلو بايت).
أنشأت شركة Yaohai Bio-Pharma مجموعة من تقنيات تخليق mRNA لتوفير mRNA غير المضخم وmRNA المضخم ذاتيًا (1000 nt~14000 nt)، مثل تصميم التسلسل وتحسينه، IVT، التنقية، التجفيد، وتغليف الجسيمات الدهنية النانوية (LNP). . يتم إصدار جميع المنتجات وفقًا لمعايير مراقبة الجودة الصارمة.
الشكل 1. السمات الهيكلية لـ IVT mRNAs: mRNA التقليدي والدائري والمضخم ذاتيًا.
يشتمل الحمض النووي الريبي (RNA) المتضخم ذاتيًا على أربعة بروتينات غير بنيوية (تُعرف باسم nsP1 وnsP2 وnsP3 وnsP4)، وهي مشتقة من فيروسات ألفا، وفيروس التهاب الدماغ الخيلي الفنزويلي (VEEV). من بين هذه الأنشطة، يُظهر nsP1 أنشطة إنزيمية مزدوجة، وهي GTase وN7MTase، في حين يمتلك nsP2 نشاط RTPase، وهو أمر محوري لتحديد IVT mRNA لإنشاء بنية Cap 0. بالإضافة إلى ذلك، يعمل nsP2 بمثابة بروتياز وهيليكاز، مما يسهل المعالجة المعقدة لمجمع nsP بأكمله. لا تزال الوظيفة الدقيقة لـ nsP3 بعيدة المنال، ومع ذلك فهي تشارك في التفاعلات مع بروتينات الخلية المضيفة المتنوعة، مما يساهم في تخفيف الاستجابة المضادة للفيروسات التي يقوم بها المضيف.
توجد منطقة المروج الجينومي الفرعي لفيروس ألفا (SGP) قبل الجين محل الاهتمام (GOI). يسهل عنصر SGP بدء نسخ GOI عن طريق تجاوز قراءة تسلسل تشفير بروتينات nsP الفيروسية.
الشكل 2: التوليف وفحوصات الخلايا لـ eGFP saRNA لمنصة Yaohai Bio-Pharma RNASci.
بروتوكول تخليق saRNA يشبه mRNA: مخصص مرنا التوليف