يعد تحديد نهاية 5' تعديلًا أساسيًا لـ mRNA. تعمل mRNAs ذات هياكل الغطاء، وخاصة هياكل Cap1، على تسهيل mRNAs للتهرب من الاستجابات المناعية الفطرية في الجسم الحي، مما يؤدي إلى ترجمة البروتين بكفاءة.
التغطية الأنزيمية (طريقة الخطوتين) هي الطريقة التقليدية لتغطية الرنا المرسال، على غرار عملية التغطية في الكائنات حقيقية النواة. تحت تأثير سلسلة من الإنزيمات، يرتبط 7-ميثيلجوانين (m7G) بالنهاية 5' من mRNA من خلال رابطة ثلاثية الفوسفات 5'-5' ويخضع لتعديل المثيلة لتشكيل هيكل الغطاء Cap 1 (m7GpppN).
رسم تخطيطي لتشكيل هيكل الغطاء الطبيعي
تدفق رد فعل السد الأنزيمي هو كما يلي:
يتم استخدام الحمض النووي البلازميد الخطي كقالب للنسخ في المختبر (IVT) في وجود بوليميراز T7، ويتم تشكيل mRNA ببنية نهاية 5' بعد تنقية خطوة واحدة باستخدام إنزيم تغطية اللقاح و2'-O. - ميثيل ترانسفيراز.
تفاصيل الخدمات
خدمة اختيارية |
تفاصيل الخدمة |
فترة التسليم (يوم) |
السد الأنزيمي مرنا |
رد فعل السد الأنزيمي |
1 |
تحسين رد الفعل - اختياري |
تصميم مكونات التفاعل وتحسينها |
3 ~ 7 |
لماذا تختار هاكروو ؟
- تصميم وتحسين عنصر رد فعل السد
تم تحسين مكون تفاعل السد، وزيادة إنتاج نسخة mRNA بشكل كبير.
- التحقق من التعبير في المختبر
يتم نقل الرنا المرسال المغطى إلى 293T من الخلايا، ويمكن اكتشاف التعبير عن البروتين المستهدف.
من خلال الرقابة الصارمة على البيئة التجريبية والمواد الاستهلاكية RNaseson، يتم منع تدهور مرنا بشكل فعال.
دراسة حالة
قامت منصة mRNA الخاصة بشركة Yaohai Bio-Pharma ببناء عملية تفاعل تغطية مثالية.
بالنسبة لـ eGFP mRNA، وهو منتج مسبق لـ mRNA تم إعداده عن طريق السد الأنزيمي، يمكن ملاحظة إشارة مضان eGFP (مضان أخضر) على مستوى عالٍ بعد نقل خلايا 293T لمدة 24 ساعة، والتي تم اكتشافها بواسطة Western Blot (WB)، مما يدل على أن يمكن التعبير عن بروتين الفلورسنت الأخضر المعزز بالبروتين المستهدف (eGFP) بكفاءة في المختبر.
التعبير عن الأنزيمية المغطاة eGFP mRNA في خلية 293T
AR
EN
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
