فيما يتعلق بالإنتاج الضخم لـ mRNA، يعد النسخ في المختبر (IVT) طريقة أكثر كفاءة ونضجًا. يعتمد تفاعل IVT الحمض النووي البلازميد الخطي الذي يحتوي على مروج T7 كقالب، ويتم تصنيع mRNA مع نوكليوزيد ثلاثي الفوسفات (NTPs) كركائز في وجود بوليميريز T7 RNA.
يعد تعديل النوكليوتيدات إنجازًا كبيرًا في استكشاف mRNA، حيث يتم التعرف على جزيئات mRNA غير المعدلة بواسطة مستشعرات RNA داخل الخلايا لتنشيط المناعة الفطرية. لاعتبارات الرنا المرسال في المناعة في الجسم الحي وكفاءة الترجمة، تستخدم عملية IVT عادةً أنواعًا معينة من NTPs المعدلة، والنيوكليوتيدات المعدلة الشائعة هي السودوريدين (Ψ)، N1-ميثيل-السودوريدين (N1Ψ)، و5-ميثيل سيتوزين (5mC).
عملية النسخ في المختبر من mRNA
مخطط التفاعل في النسخ المختبري (IVT).
تفاصيل الخدمات
خدمة اختيارية | تفاصيل الخدمة | فترة التسليم (يوم عمل) |
النسخ في المختبر (IVT) | IVT، النسخ في المختبر | 1 |
| تعديلات النوكليوتيدات (Ψ/N1Ψ/5mC، وما إلى ذلك) |
| إزالة قالب الحمض النووي (DNase I) |
تحسين حالة IVT - اختياري | تصميم مكونات التفاعل IVT وتحسينها | 2-5 |
لماذا تختار هاكروو ؟
- استراتيجيات تعديل النوكليوتيدات المتنوعة
تحسين استقرار مرنا وتعبير البروتين في الجسم الحي.
- تصميم اختبار صارم وتحسينه
يمكن تحقيق إعداد جزء من mRNA يصل إلى 10 كيلو بايت.
من خلال تحسين ظروف رد الفعل IVT، يصل معدل النسخ إلى 1:200.
الرقابة الصارمة على RNase من خلال بيئة تجريبية والمواد الاستهلاكية يمكن أن تمنع بشكل فعال تدهور الرنا المرسال.
دراسة الحالة
تم تحسين نظام التفاعل IVT الحالي تقريبًا للأنظمة الاصطناعية التي يبلغ طولها حوالي 100 nt، وليس لـ mRNAs ذات الطول التعسفي. كلما زاد طول تسلسل mRNA، زادت صعوبة النسخ وأكثر عرضة للتدهور.
من أجل إعداد تسلسلات mRNA مخصصة بطول حوالي 10 كيلو بايت، نجحت شركة Yaohai Bio-Pharma في إعداد عينات عالية الجودة مع نسبة نسخ عالية تبلغ 1:135 وحصلت على 135 ميكروغرام من منتجات mRNA المنقاة في البداية بعد 1 ميكروغرام من البلازميد الخطي. تم نسخه في المختبر من خلال التصميم التجريبي الصارم، والتحسين المستمر لظروف التفاعل، والسيطرة الصارمة على RNase.
تحديد mRNA (الرحلان الكهربي لهلام الاغاروز)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
