بالمقارنة مع السد الأنزيمي المكون من خطوتين، فإن طريقة السد النسخي المشترك المكونة من خطوة واحدة يمكن أن تقلل بشكل كبير من تدفق العملية. الطريقة موجهة نحو النتائج وتتضمن إضافة نظائرها إلى تفاعل النسخ في المختبر (IVT). يمكن تقديم نظائر الغطاء في بداية النسخ، ويمكن الحصول على mRNA مع هيكل الغطاء عند الانتهاء من النسخ. يمكن لنظائر الغطاء الحالية من الجيل الثالث تجنب الغطاء العكسي وإضافة بنية Cap 1 مباشرة إلى منتج النسخ.
لاعتبارات الرنا المرسال في المناعة في الجسم الحي وكفاءة الترجمة، غالبًا ما تعتمد عملية IVT أنواعًا معينة من NTPs المعدلة، والنيوكليوتيدات المعدلة الشائعة هي السودوريدين (Ψ)، N1-ميثيل-سودوري-دين (N1Ψ)، و5-ميثيل سيتوزين (5mC) .
الشكل: رسم تخطيطي لتفاعل النسخ المشترك والتغطية لـ mRNA
تفاصيل الخدمة
العطاء | تفاصيل الخدمة | فترة التسليم (يوم عمل) |
السد النسخي المشترك | الاستجابة النسخية في المختبر (تناظرية Clean Cap) | 1-2 |
| تعديلات النوكليوتيدات (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| إزالة قالب الحمض النووي (DNase I) |
تحسين حالة IVT - اختياري | تصميم مكونات التفاعل وتحسينها | 3-7 |
لماذا تختار هاكروو ؟
- استراتيجيات تعديل النوكليوتيدات المتنوعة
يمكن لاستراتيجيات تعديل النوكليوتيدات الاختيارية المتعددة تحسين التعبير البروتيني.
تحقيق نسبة نسخ عالية وكفاءة تغطية عالية.
تحقيق معدل سقف يزيد عن 95%.
منع تدهور مرنا بشكل فعال عن طريق التحكم الصارم في RNase في البيئة التجريبية والمواد الاستهلاكية.
دراسة حالة
قامت شركة Yaohai Bio-Pharma ببناء منصة ناضجة لعملية التغطية النسخية المشتركة، باستخدام نظائرها ذات الغطاء النظيف لإضافة بنية Cap1 مباشرة مع تجنب التغطية العكسية. بعد المعالجة المسبقة للعينة الموحدة والكشف عن التفريد الشعري (CE)، يمكن أن يصل معدل السد للبروتين الفلوري الأخضر المعزز (eGFP) mRNA إلى أكثر من 95%.
eGFP mRNA كفاءة السد لأكثر من 95٪
يتم نقل eGFP mRNA وmCherry mRNA المحضرين بواسطة السد النسخي المشترك إلى خلايا 293T، على التوالي، ولوحظ وجود إشارة فلورية قوية بعد 48 ساعة، مما يشير إلى أن الرنا المرسال يتم التعبير عنه بكفاءة في خلايا 293T.
التعبير عن eGFP mRNA وmCherry mRNA في خلية 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
