تقوم شركة Yaohai Bio-Pharma بإعداد circRNA استنادًا إلى نظام PIE (محاذاة الإكسونات والإنترونات)، والذي يعتمد على وظيفة الربط الذاتي للإنترونات من النوع الأول لتحقيق تدوير RNA. تم تصميم بنية PIE باستخدام جين T4 td أو جين سلائف الحمض الريبي النووي النقال المريب، ويكون الترتيب كما يلي:
ينقسم إنترون RNA وجزء الإكسون الداعم إلى جزأين (محطة 5' ومحطة 3')، حيث يتم نقل التسلسل الطرفي 5' إلى ذيل التسلسل المستهدف، ويتم إدخال التسلسل الطرفي 3' في الجزء الأمامي من التسلسل المستهدف، ويتم إدراج تسلسل الجينات المستهدف في المنتصف.
تحت تحفيز GTP، يؤدي هيكل PIE إلى تدوير تسلسلات أخرى غير الإنترونات. بالاشتراك مع استراتيجية تعزيز معقولة لمعدل التدوير، يمكن لـ Yaohai Bio-Pharma تحقيق cyclization للتسلسلات يصل إلى 4 كيلو بايت مع معدل cyclization يزيد عن 80%.
الشكل 1. تداول circRNA في المختبر بناءً على نظام PIE
تفاصيل الخدمات
| طريقة عملنا | خدمة اختيارية | تفاصيل الخدمة | فترة التسليم (يوم عمل) |
| تصميم تسلسل circRNA وتحسينه | تصميم وتحسين تسلسلات الترميز | محاذاة تسلسل CDS تحسين كود CDS | 1 |
| تصميم وتحسين التسلسلات غير المشفرة | تصميم وتحسين تسلسل الإنترون والإكسون تصميم تسلسل الذراع المتماثل وتحسينه تصميم تسلسل الفاصل والتحسين | 1-2 |
الاستراتيجيات المشتركة لتصميم تسلسل mRNA
| مكونات سيررنا | الوظائف البيولوجية | استراتيجيات التحسين |
| تسلسل إنترون وإكسون ثنائي الطرف | الربط الذاتي للإنترون المحفز بـ GTP من أجل تدوير التسلسلات خارج الإنترون. | تم تصميمه وفقًا لجين T4 td أو جين سلائف الحمض الريبي النووي النقال لزيت السمك. |
| البرمجة | آيريس | موقع التعرف على الريبوسوم الداخلي الذي ينظم ترجمة circRNA. | فحص تسلسل موقع دخول الريبوسوم الداخلي (IRES) من مصادر فيروسية مختلفة، مثل مصادر EMCV وCVB3. |
| CDS | مناطق ترميز البروتين، أو ترميز التسلسلات للمستضدات، أو الأجسام المضادة، أو البروتينات الوظيفية الأخرى. | تحسين الكودون يزيد من مستوى الترجمة؛ قد تلعب بعض الكودونات غير المثالية دورًا في طي البروتين. |
| غير الترميز | تسلسلات غير الترميز | استهداف miRNAs أو البروتينات لممارسة تنظيم الجينات أو البروتين. | يمكن أن يؤدي استهداف مواقع ربط معينة للجزيئات الدقيقة أو البروتينات إلى تكرار تسلسل موقع الربط. |
لماذا تختار هاكروو ؟
- الجمع بين نظام التدوير الأمثل PIE مع استراتيجيات التحسين المعقولة لتحقيق معدل التدوير لأكثر من 80٪؛
- فريق تحسين CDS المتطور التعاون مع فريق خوارزمية الذكاء الاصطناعي المحترف لإكمال تحسين رموز منطقة CDS؛
- يمكن تحقيق عملية circRNA الناضجة والكمال من خلال كفاءة التدوير العالية والثبات العالي وكفاءة الترجمة العالية.
دراسة حالة
أطلقت شركة Yaohai Bio-Pharma منتج التحكم المعزز بالبروتين الفلوري الأخضر (eGFP) circRNA، والذي يعتمد على نظام PIE لتحقيق تدوير الحمض النووي الريبي (RNA).
باستخدام كاشف ترنسفكأيشن تقليدي، يتم نقل eGFP circRNA إلى 293T من الخلايا، ويمكن اكتشاف إشارة الفلورسنت eGFP (الخضراء) بعد 24 ساعة، والتي سيتم تعزيزها بعد 48 ساعة. ولا يزال من الممكن اكتشاف إشارة الفلورسنت في اليوم السابع واليوم الرابع عشر بعد ذلك. ترنسفكأيشن.
في التحقق من صحة التعبير في المختبر من eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
