Các enzyme chủ chốt để sản xuất RNA dài
mRNA, như một loại RNA mã hóa dài, được thực hiện một cách an toàn và hiệu quả ở nhiều đối tượng hơn trong thời gian xảy ra dịch bệnh COVID-19. Các RNA mã hóa dài khác, như RNA tự khuếch đại (saRNA) và mRNA vòng (circRNA) cũng cho thấy hiệu quả trong các nghiên cứu tiền lâm sàng và lâm sàng.
Việc sản xuất RNA mã hóa dài ở quy mô lớn dựa vào phiên mã in vitro (IVT) bằng một số phản ứng enzyme. Các bước sản xuất RNA bao gồm chuẩn bị DNA mẫu, tổng hợp RNA IVT, tuần hoàn, loại bỏ DNA, chỉnh sửa RNA (gắn nắp và nối đuôi) và tinh chế RNA.
Có một số enzyme chủ chốt được sử dụng trong quá trình sản xuất RNA mã hóa dài (ví dụ, mRNA, saRNA và CircRNA), bao gồm các enzyme cắt giới hạn, T7 RNA polymerase (T7 RNAP), chất ức chế RNase, pyrophosphatase vô cơ, DNase I, enzyme giới hạn vaccinia và RNase R.
|
Quy trình xét duyệt
|
Enzyme
|
Chức năng
|
|
Chuẩn bị DNA mẫu
|
Endonuclease hạn chế
|
Tuyến tính hóa DNA plasmid (pDNA) để tránh tạo ra bản phiên mã dài hơn.
|
|
Tổng hợp RNA IVT
|
T7 RNA polymerase (T7 RNAP)
|
Liên kết với trình khởi động T7 và tạo ra bản phiên mã RNA cụ thể; Đóng vai trò quan trọng trong phản ứng IVT.
|
|
Chất ức chế RNase, tái tổ hợp
|
Ức chế hoạt động RNase trong phản ứng IVT.
|
|
Pyrophosphatase, vô cơ (iPPase)
|
Ngăn chặn pyrophosphate trong phản ứng IVT.
|
|
loại bỏ DNA
|
DNase I
|
Loại bỏ mẫu DNA.
|
|
sửa đổi RNA
|
Enzym đóng nắp bệnh đậu mùa
|
Thêm cấu trúc Cap1 vào đầu 5’ của IVT mRNA.
|
|
2'-O-Methyltransferas
|
|
làm giàu tuần hoànRNA
|
RNase R
|
Tiêu hóa RNA tuyến tính và làm giàu RNA tròn.
|
Yaohai Bio-Pharma cung cấp giải pháp CDMO toàn diện cho Enzyme
VI
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
