mRNA đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu chức năng của gen hoặc protein. Đồng thời, nó cũng phổ biến trong việc phát triển sinh phẩm dự phòng và điều trị. Là một chiến lược tổng hợp thông thường cho các phân tử RNA, quá trình phiên mã in vitro (IVT) giúp chúng ta có được các bản sao tùy chỉnh một cách hiệu quả.
Yaohai Bio-Pharma đã thiết lập một bộ công nghệ tổng hợp mRNA để cung cấp RNA chất lượng cao, chẳng hạn như thiết kế và tối ưu hóa chuỗi, IVT, tinh chế, làm khô và bao bọc vào hạt lipid nano (LNP). Tất cả sản phẩm đều được phát hành theo tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng (QC) nghiêm ngặt.
Với sự bùng phát của đại dịch COVID-19 vào năm 2020, công nghệ mRNA đã tiến bộ vượt bậc, và các nghiên cứu liên quan cũng như ứng dụng của nó đã đạt được sự phát triển chưa từng có, bao gồm vắc xin dự phòng cho việc ngăn ngừa bệnh truyền nhiễm, vắc xin điều trị ung thư và thuốc, liệu pháp điều trị khối u, liệu pháp thay thế protein, y học tái tạo và liệu pháp tế bào và gen (CGT).
vaccine mRNA | thuốc mRNA |
|
Quy trình | Dịch vụ tùy chọn | Chi Tiết Dịch Vụ | Thời gian Giao hàng (ngày làm việc) | Sản phẩm Giao |
thiết kế và Tối ưu Hóa Dãy mRNA | Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi mã hóa | Thiết kế chuỗi CDS và tối ưu hóa codon | 1-3 | Tệp dãy |
Thiết kế và tối ưu hóa các chuỗi không mã hóa | Thiết kế và tối ưu hóa UTR, chuỗi polyA | |||
Chuẩn bị mồi phiên mã | Chuẩn bị plasmid tái tổ hợp | Hợp thành gen | 7-10 | |
Phóng đại và chiết xuất plasmid | 4 | |||
Khiến plasmid trở thành dạng tuyến tính và tinh chế | ||||
phiên mã mRNA in vitro | Đính nắp đồng phiên mã (phương pháp một bước) | Phiên mã in vitro (IVT) \/ Nắp tương tự | 1-2 | N/A |
Sửa đổi nucleotide (sửa đổi UTP/CTP) | ||||
Loại bỏ mẫu DNA (DNase I) | ||||
Capping enzymatic (quy trình hai bước) | IVT | 2-3 | ||
Sửa đổi nucleotide (sửa đổi UTP/CTP) | ||||
Loại bỏ mẫu DNA (DNase I) | ||||
tinh chế mRNA (lithium chloride/magnetic beads) | ||||
Capping enzymatic | ||||
tinh chế mRNA | Phương pháp tinh chế thông thường | Tụ tập lithium chloride | 1 | chất dược mRNA |
Tinh chế bằng magnetic bead | ||||
Phương pháp tinh chế bằng cột chromatography | Kết hợp nhiều phương pháp sắc ký | 1-2 | ||
Trao đổi đệm | Ultrafiltration | 1 | ||
khô đông mRNA | Phân ly đông khô | Tiền đông lạnh | 2-3 | bột đông khô mRNA |
Sấy sơ cấp (chưng cất) | ||||
Sấy thứ cấp (bốc hơi) | ||||
viên nang mRNA | Bao bọc LNP | Bao bọc LNP | 2-3 | sản phẩm thuốc mRNA-LNP |
Nồng độ và trao đổi đệm | ||||
phân tích chất lượng mRNA | chất hoạt động dược mRNA / bột đông khô | Nồng độ, độ tinh khiết | 1 | Báo cáo thử nghiệm |
Tính toàn vẹn, hiệu suất capping, phân bố đuôi polyA | 2-5 | |||
sản phẩm thuốc mRNA-LNP | Hiệu suất bao bị | 1 | ||
Kích thước hạt và phân bố | ||||
Phụ tải bề mặt | ||||
xác thực biểu hiện mRNA | đánh giá tế bào 293T | Trồng tế bào | 4 | |
Chuyển gen nhất thời vào tế bào | ||||
Quan sát tín hiệu huỳnh quang | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Phản ứng miễn dịch enzyme liên kết (ELISA) |
mũ 5' |
▪ Không mũ ▪ Cap0, đồng mũ ▪ Cap1, đồng mũ ▪ Cap1, đính mũ enzym |
5’ UTR\/3’ UTR |
▪ Dãy UTR tự nhiên ▪ Dãy UTR đột biến/Kỹ thuật |
đuôi PolyA 3' |
▪ Đuôi 100A ~120A (được khuyến nghị) ▪ Đuôi polyA phân đoạn ▪ Các đuôi tùy chỉnh khác |
Các nucleoside được sửa đổi |
▪ Các base không được sửa đổi ▪ Pseudouridine (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridine (N1Ψ) ▪ 5-methylcytosine (m5C) ▪ 5-methyluridine (m5U) ▪ 5-methoxyuridine (5moU) ▪ 2-thiouridine (s2U) ▪ 2′-O-methyl-U ▪ Các sửa đổi khác |
Quy trình Dịch vụ Tích hợp
Cung cấp một loạt các dịch vụ từ thiết kế chuỗi đầu vào đến chuẩn bị mRNA, kiểm soát chất lượng và xác nhận biểu hiện ở giai đoạn sau.
Thiết kế và Tối ưu Hóa Chuỗi Đỉnh Cao Quốc Tế
Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi mRNA chuyên nghiệp giúp tăng cường biểu hiện mRNA hiệu quả.
Các sửa đổi nucleotide đa dạng
Hiệu quả tăng biểu hiện mRNA và giảm các phản ứng miễn dịch không mong muốn của mRNA.
Nền tảng tinh chế trưởng thành
Bằng cách kết hợp phương pháp tinh chế truyền thống và tự thiết kế, các mẫu mRNA được thu được với độ tinh khiết cao.
Nền tảng QC hoàn chỉnh
Phong phú các tùy chọn QC để đáp ứng yêu cầu của các bài kiểm tra thường quy, chẳng hạn như nồng độ, độ tinh khiết A260/280 và tính toàn vẹn, cũng như các yêu cầu kiểm soát chất lượng cao, chẳng hạn như hiệu suất gắn mũ/polyA phân bố.
Giao hàng nhanh chóng
MRNA tùy chỉnh có thể được giao trong vòng 7 ngày, ngoại trừ việc tổng hợp trình tự bên ngoài.