Yaohai Bio-Pharma chuẩn bị CircRNA dựa trên hệ thống PIE (căn chỉnh exon và intron), hệ thống này dựa vào chức năng tự ghép của các intron loại I để đạt được chu trình RNA. Cấu trúc PIE được thiết kế bằng cách sử dụng gen T4 td hoặc gen tiền thân tRNA tanh và sự sắp xếp như sau:
Đoạn intron RNA và đoạn exon hỗ trợ được chia thành hai phần (đầu 5' và đầu 3'), trong đó trình tự đầu 5' được chuyển đến đuôi của trình tự đích, trình tự đầu cuối 3' được chèn vào phía trước của trình tự đích. trình tự mục tiêu và trình tự gen mục tiêu được chèn vào giữa.
Dưới sự xúc tác của GTP, cấu trúc PIE dẫn đến sự tạo vòng của các trình tự không phải là intron. Kết hợp với chiến lược nâng cao hợp lý về tốc độ chu kỳ, Yaohai Bio-Pharma có thể đạt được tốc độ chu kỳ lên tới 4 kb với tốc độ chu kỳ hơn 80%.
Hình 1. Sự tuần hoàn in vitro của CircRNA dựa trên hệ thống PIE
Chi tiết dịch vụ
| Quy trình xét duyệt | Dịch vụ tùy chọn | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (ngày làm việc) |
| thiết kế và tối ưu hóa trình tự CircRNA | Thiết kế và tối ưu hóa trình tự mã hóa | Căn chỉnh trình tự CDS Tối ưu hóa codon CDS | 1 |
| Thiết kế và tối ưu hóa các chuỗi không mã hóa | Thiết kế và tối ưu hóa trình tự intron và exon Thiết kế và tối ưu hóa trình tự cánh tay tương đồng Thiết kế và tối ưu hóa trình tự Spacer | 1-2 |
Các chiến lược chung cho thiết kế trình tự mRNA
| Thành phần CircRNA | Chức năng sinh học | Chiến lược tối ưu hóa |
| Trình tự intron và exon hai đầu cuối | Tự ghép intron được xúc tác GTP để tạo chu kỳ các trình tự bên ngoài intron. | Được thiết kế theo gen T4 td hoặc gen tiền thân tRNA dầu cá. |
| Lập trình | IRES | Vị trí nhận biết ribosome bên trong điều chỉnh quá trình dịch mã của CircRNA. | Sàng lọc các trình tự vị trí xâm nhập ribosome bên trong (IRES) từ các nguồn virus khác nhau, ví dụ như nguồn EMCV, CVB3. |
| CDS | Vùng mã hóa protein, trình tự mã hóa kháng nguyên, kháng thể hoặc các protein chức năng khác. | Tối ưu hóa codon làm tăng mức độ dịch mã; một số codon không tối ưu nhất định có thể đóng vai trò trong việc gấp protein. |
| Không mã hóa | Trình tự không mã hóa | Nhắm mục tiêu miRNA hoặc protein để thực hiện điều hòa gen hoặc protein. | Nhắm mục tiêu các vị trí liên kết cụ thể cho miRNA hoặc protein có thể lặp lại trình tự của vị trí liên kết. |
Các tính năng của chúng tôi
- Hệ thống chu kỳ PIE được tối ưu hóa Kết hợp với các chiến lược tối ưu hóa hợp lý để đạt được tỷ lệ chu kỳ trên 80%;
- Nhóm tối ưu hóa CDS tiên tiến Hợp tác với nhóm thuật toán AI chuyên nghiệp để hoàn thành việc tối ưu hóa các codon vùng CDS;
- Quá trình trưởng thành và hoàn hảo có thể đạt được CircRNA với hiệu suất chu kỳ hóa cao, độ ổn định cao và hiệu quả dịch mã cao.
nghiên cứu trường hợp
Yaohai Bio-Pharma đã tung ra sản phẩm đối chứng tuần hoàn protein huỳnh quang màu xanh lá cây (eGFP) tăng cường, dựa trên hệ thống PIE để đạt được chu kỳ RNA.
Bằng cách sử dụng thuốc thử chuyển hóa thông thường, eGFP CircRNA được chuyển vào các tế bào 293T và tín hiệu huỳnh quang eGFP (màu xanh lá cây) có thể được phát hiện sau 24 giờ, tín hiệu này sẽ được tăng cường sau 48 giờ. Tín hiệu huỳnh quang vẫn có thể được phát hiện vào ngày thứ 7 và ngày thứ 14 sau đó sự truyền nhiễm.
Xác thực biểu hiện in vitro của eGFP CircRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
