Việc chuẩn bị CircRNA yêu cầu RNA tuyến tính làm vật liệu tiền chất (RNA tiền chất) cho quá trình tạo vòng, trong đó RNA tiền chất thường được chuẩn bị bằng cách sử dụng DNA plasmid tuyến tính làm mẫu bản cho quá trình phiên mã và phiên mã in vitro với sự giúp đỡ của polymerase RNA T7.
DNA plasmid chất lượng cao là yếu tố thiết yếu cho quá trình phiên mã in vitro (IVT). Dựa trên nền tảng dịch vụ chuẩn bị plasmid chín muồi, Yaohai Bio-Pharma có thể cung cấp dịch vụ chuẩn bị DNA plasmid tuyến tính độ tinh khiết cao và đạt tiêu chuẩn để đảm bảo tính toàn vẹn của sản phẩm IVT.
Quy trình | Dịch vụ tùy chọn | Chi Tiết Dịch Vụ | Thời gian Giao hàng (ngày làm việc) |
Chuẩn Bị Plasmid Vòng | Hợp thành gen | Hợp thành Gen (Bên thứ ba) | 7-10 |
Phóng đại Plasmid | Phóng đại Plasmid | 2 | |
Chiết xuất Plasmid | |||
Chuẩn bị Plasmid tuyến tính | Khiến plasmid trở thành dạng tuyến tính và tinh chế | Phân mảnh plasmid | 1 |
Tinh chế DNA Tuyến tính | |||
Kiểm soát chất lượng DNA plasmid | Độ tinh khiết nồng độ | Quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
Kiểu plasmid | Chạy điện泳 trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao quản (CE) - Tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Xác định enzyme hạn chế / AGE |
Chọn phương pháp tuyến tính linh hoạt
Tối ưu hóa phương pháp chiết xuất và tinh chế DNA để đạt được tỷ lệ thu hồi cao.
Tiêu chuẩn kiểm soát quy trình nghiêm ngặt, với tỷ lệ cấu hình siêu cuộn của mẫu plasmid cho nghiên cứu trên 80%.
Dịch vụ chuẩn bị và kiểm soát chất lượng plasmid có tiêu chuẩn cao và hiệu quả cao để đáp ứng nhu cầu thí nghiệm.
Lấy ví dụ sản phẩm mCherry circRNA của Yaohai Bio-Pharma, tỷ lệ siêu cuộn của mẫu plasmid làm khuôn chuyển bản (cấp độ nghiên cứu) là hơn 70%, với tỷ lệ tuyến tính gần 100%.
mCherry circRNA được chuẩn bị với plasmid tuyến tính làm bản mẫu và chuyển vào tế bào 293T. Mức biểu hiện florescence cao (florescence đỏ) được phát hiện sau 24 giờ chuyển gen, sẽ được tăng cường sau 48 giờ, và vẫn có thể được phát hiện vào ngày thứ 7 và ngày thứ 14 sau khi chuyển gen.
protein mCherry được biểu hiện ổn định và hiệu quả, và độ tinh khiết của bản mẫu phiên mã có thể đáp ứng yêu cầu của sản phẩm dược circRNA chất lượng cao.
Xác thực biểu hiện in vitro của mCherry circRNA