MRNA vòng (circRNA) đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu về chức năng gen hoặc protein. Đồng thời, nó cũng phổ biến trong việc phát triển sinh phẩm phòng ngừa và điều trị, tương tự như mRNA.
Yaohai Bio-Pharma đã thiết lập một bộ công nghệ tổng hợp circRNA để cung cấp RNA chất lượng cao, chẳng hạn như thiết kế và tối ưu hóa chuỗi, phiên mã in vitro (IVT), tạo vòng hóa, tinh chế và bao bọc bằng hạt nano lipid (LNP). Tất cả sản phẩm đều được phát hành dưới các tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng (QC) nghiêm ngặt.
So với mRNA tuyến tính, RNA vòng (circRNA) ổn định hơn về cấu trúc và là điểm nóng chính trong nghiên cứu thuốc acid nucleic hiện nay. circRNA có phạm vi ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực, dù là circRNA mã hóa hay không mã hóa, bao gồm vắc xin phòng ngừa cho bệnh nhiễm trùng, vắc xin điều trị ung thư, thuốc điều trị ung thư, liệu pháp thay thế protein, y học tái tạo, liệu pháp tế bào và gen (CGT), vai trò của phân tử bọt biển và RNA aptamer.
Quy trình | Dịch vụ tùy chọn | Chi Tiết Dịch Vụ | Thời gian giao hàng (Ngày) |
thiết kế và Tối ưu Hóa Trình Tự circRNA | Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi mã hóa | Tối ưu hóa mật mã CDS | 1 |
Thiết kế và tối ưu hóa các chuỗi không mã hóa | Thiết kế và Tối ưu Hóa Trình Tự Intron và Exon, Tay Đồng Quê và Khoảng Cách | 1-2 | |
Chuẩn Bị Plasmid Vòng | Hợp thành gen | Hợp thành Gen (Bên thứ ba) | 7-10 |
Phóng đại Plasmid | Phóng đại Plasmid | 2 | |
Chiết xuất Plasmid | |||
Chuẩn bị Plasmid tuyến tính | Khiến plasmid trở thành dạng tuyến tính và tinh chế | Phân mảnh plasmid | 1 |
Tinh chế DNA Tuyến tính | |||
Bản sao ngoài tế bào và Cyclization | Bản sao ngoài tế bào và Cyclization | Phản ứng Bản sao ngoài tế bào và Cyclization | 1-2 |
Tiêu hóa RNase R | |||
Tối ưu hóa-tùy chọn | Phản ứng Tỷ lệ, Thời gian Tối ưu hóa | 2-5 | |
tinh chế circRNA | Phương pháp Tinh chế Truyền thống | Tụ tập lithium chloride | 1 |
Tinh chế bằng magnetic bead | 1 | ||
Tinh chế circRNA Siêu Sạch | Lý thuyết Tách Chiết Hiệu Suất Cao Chuẩn Bị (HPLC) | 1-2 | |
Trao đổi đệm | Ultrafiltration | 1 | |
phân ly circRNA | Đổ Mẫu | Đặt đầy | 2-3 |
Phân ly đông khô | Tiền đông lạnh | ||
Sấy sơ cấp (chưng cất) | |||
Sấy thứ cấp (bốc hơi) | |||
bao bị circRNA-LNP | Bao bọc LNP | Xử lý tiền xử lý vật liệu và dung dịch | 2 |
Trộn bằng thiết bị vi lưu chất | |||
Trao đổi đệm | Lọc dòng chảy tiếp tuyến | 1 | |
Tiệt trùng | Lọc | ||
Kiểm soát Chất lượng DNA Plasmid | Nồng độ/cường độ | Quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
Kiểu plasmid | Chạy điện泳 trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao quản (CE) - Tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Xác định enzyme hạn chế/AGE | ||
Kiểm soát chất lượng circRNA | Nồng độ/cường độ | Quang phổ tia cực tím (UV) | - |
Tính tinh khiết | Phân tích điện di trên gel agarose (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - Tùy chọn | 1 | ||
Kiểm soát chất lượng circRNA-LNP | Hiệu suất bao bị | Phương pháp RiboGreen | 1 |
Kích thước hạt | Kỹ thuật tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Chỉ số đa phân | Kỹ thuật tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Tiềm năng Zeta | Kỹ thuật tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Thử nghiệm hiệu lực dựa trên tế bào | Chuyển gen tế bào | Trồng tế bào, chuyển gen tế bào | 4 |
Phát hiện protein đích | Quan sát huỳnh quang, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Chúng tôi đã chuyển gen circRNA có chứa protein huỳnh quang xanh tăng cường (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA vào tế bào 293T và phát hiện protein đích thông qua tín hiệu huỳnh quang, phát quang hoặc màu, western blot (WB), phương pháp hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme (ELISA).
Thử nghiệm hiệu lực dựa trên tế bào của mẫu circRNA bởi Yaohai Bio-Pharma