Ý nghĩa của việc lọc chủng
Việc chọn lọc các chủ thể phù hợp là cần thiết cho sự phát triển CMC của dược phẩm sinh học, điều này quyết định chất lượng và tính nhất quán của sản phẩm và quy trình sản xuất. Mục tiêu trực tiếp của việc sàng lọc chủ thể là cung cấp một ngân hàng tế bào gốc (PCB) ứng viên, với mức độ biểu hiện cao và tính ổn định cao cả về độ ổn định qua các thế hệ và độ ổn định khi bảo quản. Việc chọn lọc chủ thể phù hợp là cần thiết vì hai lý do chính:
- Thứ nhất, để chọn chủ thể vi sinh có mức độ biểu hiện cao. Có nhiều chủng thương mại được sử dụng để biểu hiện các loại protein khác nhau, như protein độc, protein tan trong nước hoặc protein từ sinh vật nhân thực.
- Thứ hai, để sàng lọc chủ thể có tính ổn định di truyền. Kiểm tra tính ổn định di truyền là một điểm then chốt trong suốt vòng đời sản xuất. Được khuyến nghị rằng tính ổn định di truyền cao được công nhận là đặc trưng quan trọng khác của chủng phù hợp.
Từ khóa: lựa chọn chủng vi sinh, sàng lọc chủng vi sinh, sàng lọc thông lượng cao của vi khuẩn hoặc nấm men, sàng lọc chủng sản xuất cao, sàng lọc chủng ổn định cao, sàng lọc chủng ổn định di truyền Ứng dụng: y học con người, y học thú y, vắc xin, sinh học tổng hợp, sinh phẩm phân tử lớn tái tổ hợp, chất làm phản ứng sinh học
Dịch vụ Sàng lọc Chủng của Yaohai Bio-Pharma
Nhờ hơn 10 năm kinh nghiệm CDMO trong lĩnh vực sinh học vi sinh, chúng tôi hỗ trợ phát triển và sản xuất các phân tử lớn khác nhau, bao gồm vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, hạt giống virus (VLP), hormone (insulin, GLP-1, hormone tăng trưởng), cytokine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), yếu tố tăng trưởng (EGF, FGF, NGF), nanobody/ kháng thể đơn miền (sdAbs), enzyme, v.v.
Chúng tôi đã tích lũy được nhiều kinh nghiệm trong việc lựa chọn các loại vector plasmid và chủ nhà vi sinh khác nhau, bao gồm Vi khuẩn Escherichia coli (E. coli), và nấm men Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Chúng tôi có thể tìm ra hệ thống biểu hiện tốt nhất cho sinh phẩm độc đáo của bạn.
Chúng tôi đã thu thập nhiều loại vi sinh vật khác nhau với nguồn gốc rõ ràng và CoA tiêu chuẩn, bao gồm E.Coli biểu hiện và biểu hiện men.
Chi Tiết Dịch Vụ
Dịch Vụ
|
Chi Tiết Dịch Vụ
|
Thời gian tối thiểu\/ngày
|
Các kết quả đạt được
|
Xây dựng chủng (E. coli)
|
Chuyển plasmid (nhiều loài chủ)
|
5
|
CoA của các loài chủ thương mại Báo cáo xây dựng chủng
|
Xác minh PCR
|
Tinh khiết hóa chủng
|
Bảo quản chủng
|
Xây dựng chủng (Men)
|
Chuẩn bị tế bào men có năng lực
|
10
|
Phân mảnh plasmid
|
Điện chuyển
|
Sàng lọc kháng thuốc / Thiếu hụt dinh dưỡng
|
Tinh khiết hóa chủng
|
Bảo quản chủng
|
Màn hình chủ phù hợp
|
Chiết xuất DNA plasmid hoặc Genome
|
15-20
|
Quá trình sàng lọc vật chủCOA của các chủng biến đổi kỹ thuật
|
Xác minh PCR, tiêu hóa enzyme hạn chế
|
Phân tích trình tự gen mục tiêu
|
Lọc các chủ thể có biểu hiện cao
|
Lọc các chủ thể có sự ổn định di truyền
|
Bảo quản chủng
|
Nghiên cứu trường hợp
Một vật chủ phù hợp cải thiện mức độ biểu hiện protein lên 2,5 lần.
Chúng tôi được ủy quyền phát triển sản xuất cao E. coli căng thẳng. Và chúng tôi đã thử 3 loại quảng cáo E. coli các vật chủ, dựa trên các đặc điểm của protein mục tiêu. Nó cho thấy rằng chủng S1-1 và S1-2 (Hình A: Lane 1,2) cải thiện mức protein lên 3,5 lần so với chủng ban đầu của khách hàng (Hình A: Lane 3).
Ngoài ra, chủng S1-1 có tính ổn định di truyền cao (Hình B), và nó được công nhận là chủng ứng cử viên cho ngân hàng tế bào chính (PCB).

Đặc điểm Dịch vụ của Chúng tôi
Chuyên môn đã được chứng minh với nhiều loại chủ vi sinh vật khác nhau, ví dụ như E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; S. cerevisiae và H. polymorpha .
Chúng tôi có kinh nghiệm với E. coli biểu hiện ngoại bào, tan trong dung dịch và biểu hiện dưới dạng khối bao gồm protein, cũng như biểu hiện nội bào hoặc ngoại bào trong men. Chúng tôi không thêm kháng sinh hoặc chỉ thêm kháng sinh theo hướng dẫn quy định.
Chúng tôi thiết lập một nền tảng sàng lọc thông lượng cao để chọn lọc các chủng có năng suất cao và ổn định từ hơn một trăm chủng ứng cử.
Quá trình cải tiến và sàng lọc chủng được đảm bảo có thể truy xuất nguồn gốc, tuân thủ theo Quản lý Dữ liệu và Hồ sơ Tốt.