Dữ liệu ánh xạ peptide dựa trên sắc ký lỏng-khối phổ (LC-MS) sẽ cung cấp một lượng lớn thông tin về cấu trúc bậc một và bậc cao của protein tự nhiên và tái tổ hợp, bao gồm độ bao phủ trình tự axit amin, sửa đổi sau dịch mã (PTM, ví dụ: glycosyl hóa , oxy hóa, khử amit), liên kết disulfua, v.v.
Yaohai Bio-Pharma cung cấp dịch vụ phân tích lập bản đồ peptide cho protein mục tiêu của bạn bằng LC-MS, để tăng tốc độ nghiên cứu về cấu trúc protein của bạn.
Chúng tôi đã tham gia vào Nghiên cứu đặc tính cấu trúc protein của nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, Nanobody/VHH/Kháng thể miền đơn (sdAbs), Mảnh kháng thể, Hormon/Peptit, Cytokine, Yếu tố tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, vân vân.
Yêu cầu quy định đối với việc lập bản đồ peptide
Hướng dẫn của ICHQ6B khuyến nghị: “Việc phân mảnh có chọn lọc sản phẩm thành các peptide riêng biệt được thực hiện bằng cách sử dụng enzyme hoặc hóa chất thích hợp và các mảnh peptide thu được được phân tích bằng HPLC hoặc quy trình phân tích thích hợp khác. Các đoạn peptide phải được xác định càng nhiều càng tốt bằng cách sử dụng các kỹ thuật như phân tích thành phần axit amin, giải trình tự đầu N hoặc phép đo phổ khối (MS). Lập bản đồ peptide của hoạt chất hoặc sản phẩm thuốc (DP) bằng phương pháp được xác nhận thích hợp là phương pháp thường được sử dụng để xác nhận cấu trúc sản phẩm mong muốn để xuất xưởng theo lô.”
Phương pháp phân tích
| nghiên cứu |
Phương pháp |
| Lập bản đồ peptide |
Phân hủy protease và sắc ký lỏng-khối phổ (LC-MS) |
Thủ tục phân tích
1. Khử và kiềm hóa
Mục đích là để giảm cầu nối disulfide và ngăn chặn thiol tự do được tạo ra. Giảm cầu nối disulfide giúp mở cấu trúc protein giúp quá trình tiêu hóa protein hiệu quả hơn. Bước này cũng sẽ phá vỡ cầu nối giữa các chuỗi trong trường hợp protein đa chuỗi có cầu nối disulfide liên kết các chuỗi (ví dụ: kháng thể đơn dòng,mAbs).
2. Tiêu hóa protein bằng enzyme
Mục đích là phân hủy protein thành peptide. Chúng tôi đã chọn các enzyme dựa trên trình tự lý thuyết của protein và kiến thức về quá trình tiêu hóa protein theo lý thuyết bằng enzyme. Chọn enzyme theo cách này sẽ mang lại kết quả phân tích ánh xạ peptide tốt nhất.
3. Phân tích các peptide được tiêu hóa Sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo trực tuyến với đầu dò tia cực tím (UV) và khối phổ phun điện tử (LC/ES-MS).
Tách peptide dựa trên độ phân cực bằng LC (LC pha ngược)
Khi peptide rửa giải khỏi cột LC, máy quang phổ khối sẽ tạo ra thông tin khối cùng với thông tin ion mảnh, cho phép chúng ta xác định thông tin trình tự. Chúng tôi sử dụng thông tin trình tự để xác nhận danh tính peptide và cung cấp thông tin chính.
Chúng ta cũng có thể tạo ra thông tin phân mảnh từ các peptide khi chúng đi vào nguồn máy quang phổ khối từ cột LC. Tùy theo yêu cầu của nghiên cứu mà đây là LC-MS/MS chọn lọc hoặc không chọn lọc, có thể coi là một dạng MS song song.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
