Dữ liệu bản đồ peptide dựa trên sắc ký lỏng - phổ chất lượng (LC-MS) sẽ cung cấp một lượng lớn thông tin về cấu trúc bậc nhất và bậc cao hơn của protein gốc và tái tổ hợp, bao gồm độ phủ chuỗi axit amin, các sửa đổi sau khi dịch (PTMs, ví dụ: glycosylation, oxidation, deamidation), liên kết disulfide, v.v.
Yaohai Bio-Pharma cung cấp dịch vụ phân tích bản đồ peptide cho protein mục tiêu của bạn bằng LC-MS, để đẩy nhanh nghiên cứu về cấu trúc protein của bạn.
Chúng tôi đã tham gia vào việc Đặc trưng hóa Cấu trúc Protein của nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin Tái tổ hợp, Nanobodies/VHHs/ Antibody đơn miền (sdAbs), Phân đoạn Antibody, Hormone/Peptide, Cytokine, Yếu tố Tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, v.v.
Yêu cầu Quy định đối với Peptide Mapping
Hướng dẫn ICHQ6B khuyến nghị, “Việc phân mảnh chọn lọc sản phẩm thành các peptit rời rạc được thực hiện bằng các enzym hoặc hóa chất thích hợp và các mảnh peptit kết quả được phân tích bằng HPLC hoặc phương pháp phân tích thích hợp khác. Các mảnh peptit nên được xác định尽 có thể bằng các kỹ thuật như phân tích thành phần axit amin, giải trình tự đầu N hoặc phổ khối (MS). Bản đồ peptit của chất hoạt động hoặc sản phẩm thuốc (DP) sử dụng phương pháp đã được kiểm chứng phù hợp là một phương pháp thường được sử dụng để xác nhận cấu trúc sản phẩm mong muốn cho việc phát hành lô.”
Phương pháp phân tích
| Phân tích |
Phương pháp |
| Bản đồ Peptide |
Tiêu hóa Bằng Protease Và Cromatografi Dung Dịch-Kỹ Thuật Phổ Khối (LC-MS) |
Quy Trình Phân Tích
1. Giảm và Alkyl hóa
Mục đích là làm giảm các cầu disulfide và ngăn chặn nhóm thiol tự do được tạo ra. Việc giảm các cầu disulfide giúp mở rộng cấu trúc protein, khiến quá trình tiêu protein bằng enzym hiệu quả hơn. Bước này cũng sẽ phá vỡ các cầu nối giữa các chuỗi trong trường hợp protein đa chuỗi có các cầu disulfide liên kết giữa các chuỗi (ví dụ: kháng thể đơn dòng, mAbs).
2. Tiêu protein bằng enzym
Mục đích là phân giải protein thành các peptit. Chúng tôi chọn enzym dựa trên chuỗi lý thuyết của protein và kiến thức về quá trình tiêu protein lý thuyết bởi enzym. Việc chọn enzym theo cách này nên dẫn đến phân tích bản đồ peptit tốt nhất.
3. Phân tích các peptit đã được tiêu Sử dụng Kromatografi Tương Phase Ngược Trực Tuyến - Hiệu Suất Cao với Phát Hiện Tia Tử Ngoại (UV) và Phát Hiện Bằng Phổ Khối Điện Xịt (LC/ES-MS).
Phân tách peptit dựa trên độ cực tính sử dụng LC (tương phase ngược-LC)
Khi peptit được tách ra khỏi cột LC, máy quang phổ khối sẽ tạo ra thông tin khối cùng với thông tin ion phân mảnh, điều này cho phép chúng ta xác định thông tin chuỗi. Chúng tôi sử dụng thông tin chuỗi để xác nhận danh tính peptit và cung cấp thông tin sơ cấp.
Chúng tôi cũng có thể tạo ra thông tin phân mảnh từ các peptit khi chúng đi vào nguồn của máy quang phổ khối từ cột LC. Tùy thuộc vào yêu cầu của nghiên cứu, đây có thể là LC-MS/MS chọn lọc hoặc không chọn lọc, điều này có thể được coi là một dạng của MS nối tiếp.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
