Tỷ lệ chiếm chỗ glycosyl hóa N là một đặc điểm sinh lý của glycoprotein và chủ yếu tạo ra N-glycan. Dịch vụ phân tích tỷ lệ chiếm chỗ glycosyl hóa N của Yaohai Bio-Pharma được thực hiện thông qua quá trình tiêu hóa, giải phóng, làm giàu và phân tích sử dụng Kỹ thuật Phân tích Lỏng-Nhiễu xạ Điện phun Quang phổ Chất lượng-Hệ thống Phân tích Chất lượng (LC-ESI-MS/MS).
Chúng tôi đã tham gia vào việc Đặc trưng hóa Cấu trúc Protein của nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin Tái tổ hợp, Nanobodies/VHHs/ Antibody đơn miền (sdAbs), Phân đoạn Antibody, Hormone/Peptide, Cytokine, Yếu tố Tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, v.v.
Yêu cầu Quản lý đối với Tỷ lệ Chiếm chỗ Glycosyl hóa N
Theo hướng dẫn ICH Q6B, “đối với glycoprotein, hàm lượng carbohydrate (đường trung tính, đường amin và axit sialic) được xác định. Hơn nữa, cấu trúc của chuỗi carbohydrate, mẫu oligosaccharide (hồ sơ antennary), và vị trí glycosyl hóa của chuỗi polypeptide được phân tích ở mức độ tốt nhất có thể.”
Phương pháp Phân tích
| Phân tích |
Phương pháp |
| Tỷ lệ chiếm chỗ của vị trí N-glycosylation |
LC-MS sau khi tiêu protein bằng enzym deglycosylase và protease |
Quy trình
1. Tiêu protein thành các mảnh peptide nhỏ.
2. Giải phóng N-glycan sử dụng endoglycosidase H hoặc PNGase F. Endoglycosidase H cắt liên kết giữa hai phần tử GlcNAc trong lõi của N-linked glycans, trong khi PNGase F là một glycoamidase cắt đứt liên kết giữa GlcNAc và Asn, giải phóng toàn bộ chuỗi đường và chuyển đổi Asn thành Asp với khối lượng tăng thêm 1-Da.
3. Tăng cường N-glycopeptide thông qua HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Phân tích sự chiếm chỗ của điểm glycosylation N-liên kết sử dụng LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
