Tầm quan trọng của việc phát triển quy trình ngược dòng
Quá trình ngược dòng (USP), còn được gọi là quá trình lên men, là một trong những giai đoạn ban đầu của quá trình xử lý sinh học ngược dòng. Quá trình lên men vi sinh vật rất quan trọng đối với nuôi cấy tế bào mật độ cao và biểu hiện gen ngoại sinh, ảnh hưởng trực tiếp đến năng suất và chi phí sinh học.
Trong giai đoạn đầu phát triển sinh học (tiền lâm sàng hoặc giai đoạn 1/2), trọng tâm là phát triển các quy trình không sử dụng động vật có thể mở rộng với năng suất trung bình và đáp ứng tất cả các tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm.
Trong giai đoạn cuối (giai đoạn 3 hoặc giai đoạn thương mại), chúng tôi sẽ tập trung vào năng suất, độ bền, khả năng mở rộng và khả năng tái tạo, tạo ra một quy trình tiết kiệm chi phí. Các hoạt động giải quyết những vấn đề này là nghiên cứu đặc tính quy trình và xác nhận quy trình. Trong khi đó, các công cụ chất lượng theo thiết kế (QbD) và thiết kế thử nghiệm (DoE) thường được áp dụng.
Từ khóa: phát triển quy trình, tối ưu hóa và xác nhận, quy trình lên men, lên men tế bào vi sinh vật, lên men vi khuẩn, lên men nấm men, lên men mật độ cao, lên men chủng kỹ thuật
Ứng dụng: Công nghiệp dược phẩm sinh học, y học cho người, thú y, vắc xin, sinh học phân tử lớn tái tổ hợp, sinh học tái tổ hợp, thuốc thử sinh học
Giải pháp USP của Yaohai Bio-Pharma
Hưởng lợi từ hơn 10 năm kinh nghiệm lên men vi sinh vật, Yaohai Bio-Pharma có chuyên môn để giúp giải quyết các thách thức trong quá trình lên men. Chúng ta có thể nhanh chóng thiết lập các chiến lược lên men mật độ cao cho Escherichia coli (E. coli) bài tiết ngoại chất, biểu hiện cơ thể hòa tan hoặc hòa tan nội bào, và biểu hiện ngoại bào hoặc nội bào của nấm men.
Các dịch vụ phát triển quá trình lên men chung hiện có của chúng tôi bao gồm:
- Thiết kế quy trình lên men được thực hiện ở quy mô nhỏ 7L ở chế độ cấp liệu theo mẻ
- Xác nhận quy trình ba đợt trong máy lên men 7L
- Một quy trình trung gian mở rộng quy mô lên tới 30L/70L
Chúng tôi có thể linh hoạt thực hiện tối ưu hóa đa thông số để đáp ứng năng suất hoặc tỷ lệ mong muốn bằng cách sử dụng Hệ số một lần (OTAF) hoặc Thiết kế thử nghiệm (DoE).
Các thông số lên men chính được liệt kê như sau:
Chế phẩm môi trường lên men không có động vật
Không có kháng sinh hoặc không, Khối lượng cấy
Nhiệt độ tăng trưởng, pH, nồng độ oxy hòa tan (DO)
Chế độ cho ăn (ví dụ: cho ăn theo đợt)
Nồng độ của chất cảm ứng (ví dụ: IPTG, metanol), Điểm cảm ứng (khối lượng ướt tế bào/OD600),
Nhiệt độ cảm ứng, thời gian cảm ứng
và vv
Chi tiết dịch vụ
| Dịch Vụ |
Quy trình công nghệ |
| Nuôi cấy trong bình lắc (500 mL) |
Chuẩn bị môi trường không có động vật → Nuôi cấy hạt giống vi sinh vật → Nuôi cấy trong máy lắc → Cảm ứng → Thu hoạch |
| Trồng trọt trong máy lên men(7 L) |
Chuẩn bị môi trường không có động vật → Nuôi cấy hạt vi sinh vật → Lên men tế bào mật độ cao trong lò phản ứng sinh học 7L → Cảm ứng → Thu hoạch |
| Kiểm soát chất lượng Protein/Peptit |
Tiền xử lý Biểu hiện hòa tan nội bào: Thu hoạch và nối lại tế bào vi khuẩn → Nghiền siêu âm → Loại bỏ mảnh vụn tế bào → Chiết xuất thô Biểu hiện thể vùi: Thu hoạch và nối lại tế bào vi khuẩn → Nghiền siêu âm → chuẩn bị thể vùi → Chiết xuất thô Biểu hiện hòa tan ngoại bào: Thu thập chất nổi trên bề mặt nuôi cấy → Cô đặc và đệm trao đổi → Chiết xuất thô Phân tích chất lượng Chiết xuất thô dưới dạng mẫu → Phân tích protein mục tiêu bằng TRANG SDS hoặc Western blotting (WB) |
| Kiểm soát chất lượng của Plasmid |
Tiền xử lý và phân tích chất lượng Chiết xuất Plasmid → Phân tích DNA bằng điện di trên gel agarose |
nghiên cứu trường hợp
Chúng tôi được khách hàng ủy quyền để tăng sản lượng hormone polypeptide mục tiêu từ 8 g/L lên 10 g/L.
Dựa trên Thiết kế giai thừa đầy đủ và Thiết kế bề mặt phản hồi trong các công cụ DoE, chúng tôi đã nhanh chóng nhận ra và tối ưu hóa các thông số lên men chính. Trong quá trình lên men mật độ tế bào cao được tối ưu hóa, mức biểu hiện tăng lên 10 g/L.
Kinh nghiệm của chúng tôi
- Chúng tôi đã nghiên cứu nhiều loại vật chủ vi sinh vật khác nhau, ví dụ: E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) chủng SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) và Hansenula đa hình (H. đa hình).
- Chúng tôi có kinh nghiệm với E. coli bài tiết ngoại chất, biểu hiện cơ thể hòa tan và hòa tan, cũng như biểu hiện nội bào hoặc ngoại bào của nấm men. Hiệu suất của thể vùi lên tới 10g/L, trong khi hiệu suất protein hòa tan dao động từ 0.5 đến 15g/L.
- Chúng tôi đã tham gia vào việc phát triển và sản xuất nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, hạt giống vi rút (VLP), hormone (insulin, GLP-1, hormone tăng trưởng), cytokine (Interleukin-2/IL-2, IL -15, IL-21), các yếu tố tăng trưởng (EGF, FGF, NGF), kháng thể nano/miền đơn (sdAbs), enzyme, v.v.
- Equipment
Hệ thống lên men 7L*16
Máy phân tích sinh học Cedex, máy phân tích xử lý sinh học
VI
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
