Tổng hợp mRNA in vitro
Các thành phần chính của mRNA bao gồm nắp 5’, UTR 5’, khung đọc mở (ORF), UTR 3’ và đuôi poly A 5’, những yếu tố này là cần thiết để duy trì chức năng của mRNA. Các nhà nghiên cứu đã sử dụng nhiều phương pháp khác nhau để xác định và tối ưu hóa chuỗi và cấu trúc mRNA.
Quá trình tổng hợp mRNA được thực hiện dựa trên bản sao chép in vitro (IVT) sử dụng các mẫu DNA tuyến tính, polymerase RNA (T3, T7 hoặc SP6), nucleotide không biến đổi hoặc biến đổi, enzyme và các chất phụ gia thích hợp.
sửa đổi Nắp 5’
Các chuỗi mRNA trưởng thành từ tế bào nhân thực có một nắp 7-metylguanosin (m7G) ở đầu 5’, điều này cải thiện sự ổn định của mRNA và hiệu suất phiên dịch. Có hai phương pháp chung để bắt giữ mRNA trong môi trường in vitro. Thứ nhất, mRNA có thể được gắn nắp cùng với bản sao chép in vitro bằng cách thêm một chất tương tự nắp cấu trúc m7GpppG (chẳng hạn như CleanCap) vào hệ thống IVT. Phương pháp gắn nắp đồng thời khi phiên mã này cung cấp một cấu trúc nắp tự nhiên ở đầu 5' và tăng hiệu quả gắn nắp lên gần 90-99%. Thứ hai, việc gắn mapa mRNA cũng có thể được thực hiện thông qua các phản ứng enzym sau phản ứng phiên mã in vitro.
Sửa đổi PolyA
Poly(A) tail cũng làm tăng thời gian bán phân của mRNA trong cơ thể và cải thiện hiệu suất dịch mã mRNA. Độ dài của chuỗi poly(A) ampli nên là 100-300 nucleotide. Ngoài ra, adenosine được sửa đổi làm tăng độ ổn định của đuôi poly A chống lại sự phân hủy bởi enzym RNase trong tế bào. Đuôi Poly A có thể được chèn vào thông qua quá trình phiên mã in vitro sử dụng bản mẫu DNA mã hóa poly A, dẫn đến một độ dài cụ thể của chuỗi poly A. Enzyme polymerase poly A tái tổ hợp cũng có thể được sử dụng để polyadenylation bằng phương pháp enzym sau khi phiên mã mRNA.
Sửa đổi Nucleotide
Các nucleosid được sửa đổi có thể ức chế việc nhận diện và/hoặc kích hoạt của các receptor nhận diện mẫu (PRR) và tăng cường hiệu quả của vắc xin mRNA theo hai cách hoàn toàn khác nhau. Việc thêm vào một số nucleosid được sửa đổi hóa học, bao gồm pseudouridine (ψ), 1-methylpseudouridine (m1ψ), thiouridine (s4U) và 5-methylcytosine (m5C), có thể ngăn chặn sự kích hoạt của TLR7/8 và các receptor miễn dịch bẩm sinh khác, điều này làm giảm đáng kể tính miễn dịch của mRNA.
hệ thống giao运 mRNA
Để duy trì chức năng của mRNA, nó cần phải đi vào bào tương của tế bào chủ và biểu hiện các kháng nguyên cụ thể. Một trong những thách thức khó khăn nhất đối với vắc xin mRNA và liệu pháp mRNA là đưa mRNA vào tế bào đích với mức độ phiên mã đủ cao, đòi hỏi phải có các hệ thống giao运 mRNA đặc hiệu và hiệu quả cao. Một số vector giao运 mRNA đã được phát triển và sử dụng, bao gồm tế bào dendritic (DCs), protamine, polymer dương điện và liposome dương điện.
Phức hợp của lipid dương điện với mRNA và các chế phẩm khác có thể cùng nhau tạo thành các hạt nano kích thước 80-200 nm được gọi là hạt nano lipid (LNPs). Là một trong những hệ thống chuyển giao mRNA tiên tiến nhất, LNP bao gồm lipid dương điện có thể ion hóa, phospholipid tự nhiên, cholesterol và polyethylene glycol (PEG). Một số vắc xin RNA và liệu pháp (siRNA và mRNA) đã được Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ phê duyệt dựa trên hệ thống chuyển giao LNP.
Yaohai Bio-Pharma Cung Cấp Giải Pháp Toàn Diện Cho RNA
|
Sản phẩm RNA danh mục
- Sản Phẩm mRNA Trong Catalog
- Sản Phẩm saRNA Trong Catalog
- Sản Phẩm circRNA Trong Catalog
|
Hợp Thành RNA Theo Yêu Cầu
- Hợp Thành mRNA Theo Yêu Cầu
- Hợp thành saRNA theo yêu cầu
- Hợp thành circRNA theo yêu cầu
|
dịch vụ CDMO mRNA
- Phát triển Quy trình
- Sản xuất GMP
- Điền và hoàn thiện vô khuẩn
- Phân tích và kiểm tra
|
Kết Quả Đặt Hàng
|
Grade
|
Các kết quả đạt được
|
Thông số kỹ thuật
|
Ứng dụng
|
|
không phải GMP
|
Chất dược liệu, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Nghiên cứu tiền lâm sàng như chuyển gen tế bào, Phát triển phương pháp phân tích, Nghiên cứu tiền ổn định, Phát triển công thức
|
|
Thuốc thành phẩm, LNP-mRNA
|
|
GMP, Vô trùng
|
Chất dược liệu, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Thuốc thử nghiệm mới (IND), Giấy phép thử nghiệm lâm sàng (CTA), Cung cấp thử nghiệm lâm sàng, Đơn xin giấy phép sinh học (BLA), Cung cấp thương mại
|
|
Thuốc thành phẩm, LNP-mRNA
|
5000 lọ hoặc kim tiêm đã được điền sẵn / hộp đựng
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
