Podatki o preslikavi peptidov na podlagi tekočinske kromatografije in masne spektrometrije (LC-MS) bodo zagotovili veliko količino informacij o primarni strukturi in strukturi višjega reda nativnih in rekombinantnih proteinov, vključno s pokritostjo aminokislinskega zaporedja, posttranslacijskimi modifikacijami (PTM, npr. glikozilacija , oksidacija, deamidacija), disulfidne vezi itd.
Yaohai Bio-Pharma ponuja storitve analize kartiranja peptidov za vaše ciljne beljakovine z LC-MS, da pospešite vaše raziskave strukture beljakovin.
Sodelovali smo pri strukturni karakterizaciji beljakovin različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, nanotelesi/VHH/enodomenskim protitelesom (sdAbs), fragmenti protiteles, hormoni/peptidi, citokini, rastnimi faktorji (GF), encimi, kolageni, itd.
Regulativne zahteve za kartiranje peptidov
Smernice ICHQ6B priporočajo: »Selektivna fragmentacija produkta v diskretne peptide se izvede z uporabo ustreznih encimov ali kemikalij, nastali fragmenti peptida pa se analizirajo s HPLC ali drugim ustreznim analitskim postopkom. Peptidne fragmente je treba čim bolj identificirati s tehnikami, kot je analiza sestave aminokislin, N-terminalno sekvenciranje ali masna spektrometrija (MS). Peptidno kartiranje zdravilne učinkovine ali zdravila (DP) z uporabo ustrezno validirane metode je metoda, ki se pogosto uporablja za potrditev želene strukture izdelka za sproščanje serije.«
Analitske metode
| Analiza |
Metode |
| Kartiranje peptidov |
Proteazna prebava in tekočinska kromatografija-masna spektrometrija (LC-MS) |
Analitični postopek
1. Redukcija in alkilacija
Namen je zmanjšati disulfidne mostove in blokirati nastali prosti tiol. Zmanjšanje disulfidnih mostov pomaga odpreti strukturo beljakovin, zaradi česar je proteolitična prebava učinkovitejša. Ta korak bo tudi prekinil mostove med verigami v primeru večverižnih proteinov, ki imajo disulfidne mostove, ki povezujejo verige (npr. monoklonska protitelesa，mAbs).
2. Prebava beljakovin z uporabo encimov
Namen je razgraditi beljakovine v peptide. Encime smo izbrali na podlagi teoretičnega zaporedja proteina in znanja o teoretični razgradnji proteina z encimi. Izbira encimov na ta način bi morala imeti za posledico najboljšo analizo kartiranja peptidov.
3. Analiza prebavljenih peptidov Uporaba tekoče kromatografije visoke ločljivosti z reverzno fazo z ultravijolično (UV) in elektrosprejno masno spektrometrično detekcijo (LC/ES-MS).
Ločevanje peptidov na podlagi polarnosti z uporabo LC (reverzna faza-LC)
Ko se peptid eluira iz kolone LC, bo masni spektrometer ustvaril informacije o masi skupaj z informacijami o fragmentih ionov, kar nam omogoča določitev informacij o zaporedju. Informacije o zaporedju uporabljamo za potrditev identitete peptida in zagotavljanje primarnih informacij.
Prav tako lahko ustvarimo informacije o fragmentaciji iz peptidov, ko vstopajo v vir masnega spektrometra iz LC kolone. Odvisno od zahtev študije je to selektivna LC-MS/MS ali neselektivna, ki jo lahko obravnavamo kot obliko tandemske MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
