Rekombinantne beljakovine pogosto opazijo oksidacijo izpostavljenih stranskih verig aminokislin, kot sta triptofan (Trp) in metionin (Met), kar spremeni fizikalno-kemijske lastnosti beljakovin. Te spremembe lahko nato prispevajo k spreminjanju bioloških funkcij prizadetih proteinov, kot je izguba vezave, zmanjšanje encimske aktivnosti, nepričakovano hiter očistek. Beljakovine so pomembne tarče za oksidativne reakcije, ker hitro reagirajo z oksidanti in jih je veliko v celicah, zunajceličnih tkivih in telesnih tekočinah.
Zato je spremljanje oksidacije beljakovin ključnega pomena za uspešen biofarmacevtski razvoj.
Yaohai Bio-Pharma ponuja storitev analize oksidacije aminokislin, ki vam omogoča določanje oksidacije aminokislin s tekočinsko kromatografijo-masno spektrometrijo (LC-MS).
Sodelovali smo pri strukturni karakterizaciji beljakovin različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, nanotelesi/VHH/protitelesi z eno domeno (sdAbs), fragmenti protiteles, hormoni/peptidi, citokini, rastni faktorji (GF), encimi, kolageni, itd.
Regulativne zahteve za oksidacijo aminokislin
V skladu s smernicami ICH Q6B je mogoče oksidirane oblike odkriti in označiti s kromatografskimi, elektroforetičnimi in/ali drugimi ustreznimi analitskimi metodami (npr. tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC), kapilarna elektroforeza, masna spektroskopija, krožni dikroizem).
Analitske metode
| Analiza |
Metode |
| Oksidacija aminokislin |
LC-MS, tekočinska kromatografija visoke ločljivosti z reverzno fazo (RP-HPLC) ali hidrofobna interakcijska kromatografija tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HIC-HPLC) in masna spektrometrija |
Analitični postopki
1. Priprava vzorca
2. LC-MS
3. Analiza podatkov
Ostanki triptofana (Trp) so še posebej nagnjeni k oksidaciji zaradi visoke reaktivnosti aromatskega indola z reaktivnimi kisikovimi spojinami. Trp oksidacija zahteva nekaj izpostavljenosti ostankom Trp, ki so običajno zakopani v tridimenzionalni strukturi proteina.
Ko pa se ostanki Trp oksidirajo, se lahko pretvorijo v različne produkte z zelo različnimi lastnostmi od prvotnega Trp. Najpogostejša pot oksidacije Trp vključuje tvorbo N-formilkinurenina (masna razlika: +32).
Druga pogosto oksidirana aminokislina je metionin. Atom žvepla v ostanku Met lahko sprejme enega ali dva atoma kisika, kar vodi do tvorbe sulfoksida (masna razlika: +16) ali sulfona (masna razlika: +32), ustrezno. Ta sprememba je razmeroma pogosta zaradi tipično visoke površinske izpostavljenosti Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
