Deamidacija stranskih verig glutamina in asparagina je običajna modifikacija v smislu vpliva na lastnosti beljakovinskih biofarmacevtskih izdelkov. V ostankih glutamina lahko pride do deamidacije, vendar običajno z veliko nižjo stopnjo. Na stopnje deamidacije vplivajo temperatura, pH, lokalna proteinska struktura in bočni aminoacilni ostanki.
Yaohai BioPharma ponuja storitev testiranja deamidacije aminokislin, ki vam omogoča odkrivanje deamidacije aminokislin s tekočinsko kromatografijo-masno spektrometrijo (LC-MS).
Sodelovali smo pri strukturni karakterizaciji beljakovin različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, nanotelesi/VHH/enodomenskim protitelesom (sdAbs), fragmenti protiteles, hormoni/peptidi, citokini, rastnimi faktorji (CF), encimi, kolageni, itd.
Regulativne zahteve za deamidacijo aminokislin
V skladu s smernicami ICH Q6B je mogoče deamidirane oblike odkriti in karakterizirati s kromatografskimi, elektroforetičnimi in/ali drugimi ustreznimi analiznimi metodami.
Analitske metode
| Analiza |
Metode |
| Deamidacija |
Tekočina kromatografija-masna spektrometrija (LC-MS) |
Postopki
npr. asparaginska deamidacija
1. Encimska prebava
2. LC-MS v pogojih tekočinske kromatografije visoke ločljivosti (HPLC)
3. Analiza podatkov
Deamidacija asparagina poteka preko sukcinimidnega intermediata (Suc), ki je dovzeten za racemizacijo in hidrolizo, pri čemer nastanejo štirje izomeri Asp, vključno z L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp in D-IsoAsp.
Teoretično lahko deamidacija Gln ustvari štiri ustrezne izomere Glu s postopkom, podobnim deamidaciji Asn.
Masna spektrometrija z visoko ločljivostjo zlahka identificira masno razliko 1-Da med peptidi, ki vsebujejo Asn/Gln, in njihovimi ustreznimi deamidiranimi primerki Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
