Profiling N-glikanov je ključen za proizvodnjo biofarmacevskih sredstev. Yaohai Bio-Pharma ponuja storitev profilinga N-glikanov z uporabo tekoče kromatografije-masne spektroskopije (LC-MS) osvobobljenih in označenih glikanov. Splošni koraki pri pripravi vzorca N-glikanov vključujejo razgradnjo glikoproteina (GP), odstranitev glikozacahridov, očiščevanje, označevanje/derivacijo ter ekstrakcijo na pečnem fazi (SPE).
Bili smo vpleteni v karakterizacijo strukture proteina različnih velikih molekul, vključno s rekombinantnimi podjediničnimi cepivami, nanotijelami/VHHs/ enodomenskimi tijelom (sdAbs), odlomki tijel, hormoni/peptidi, citokinskega, rastnih faktorjev (GF), enzimov, kolagenov itd.
Uredbena zahteva za profiling N-glikanov
Po smernicah ICH Q6B, "za glikoproteine se določi količina ogljikovodikov (neutralni šećerovi, aminoshecerovi in sialne kisline). Poleg tega se analizira struktura verižnih ogljikovodikov, oligosacharidni vzorec (antenski profil) ter mesto glikozacije polipeptidske verige vse do možnega obsega.
Analitična metoda
| Analiza |
Metode |
| Profiling N-glikanov |
Analiza osvobodjenih in označenih glikanov z uporabo tekoče kromatografije-masne spektroskopije (LC-MS) |
Postopki
1. Enzimski oprostitev glikanov z Peptide N-Glikozidaz F (PNGase F)
2. Derivacije oprostljenih glikanov z 2-aminobenzamidom (2-AB)
3. Čiščenje skupajrešenih N-glikanov na stolpcu TSK Amide - 80, če so prisotne velike količine detergensov, nevolatilnih soli ali snovi z prostimi aminskimi skupinami
4. Označevanje s fluorescenčnim 2-aminobenzamidom (2-AB)
5. LC-MS analiza označenih N-glikanov
6. Analiza podatkov
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
