Pri rekombinantnih белkah se pogosto pojavlja oksidacija izpostavljenih stranskih verižev aminokiselin, kot so tryptofan (Trp) in metionin (Met), kar spreminja fiziko-kemijske lastnosti belk. Te spremembe lahko vplivajo na biološke funkcije skrbno belk, kot je izguba vezave, zmanjšanje enzimskih dejavnosti, nepričakovano hitro izbivalnost. Belke so pomembni cilji za oksidativne reakcije, ker reagirajo hitro s oksidanti in so obilne v celicah, ekscelularnih tkivih in telesnih tekočinah.
Zato je nadzor oksidacije belk ključen za uspešno razvoj biotehničnih farmacevtskih izdelkov.
Yaohai Bio-Pharma ponuja storitev analize oksidacije aminokiselin, ki vam omogoča določitev oksidacije aminokiselin z uporabo tekočinske kromatografije-masovnega spektrometra (LC-MS).
Bili smo vpleteni v karakterizacijo strukture proteina različnih velikih molekul, vključno s rekombinantnimi subunitskimi cepivi, nanotijemi / VHHs / enodomenskimi anticimeri (sdAbs), odlomki anticimer, hormoni/peptidi, citokinske, rastne faktorje (GF), enzimi, kolagene itd.
Regulativni zahtevi za oxidacijo aminokislin
Po smernicah ICH Q6B je mogoče oksidirane oblike zaznati in jih karakterizirati z kromatografskimi, elektroforetičnimi in/ali drugimi primerenimi analitičnimi metodami (npr. visoko učinkovita tekočinska kromatografija (HPLC), kapilarna elektroforeza, masna spektroskopija, krožna dieletrika).
Analitične metode
| Analiza |
Metode |
| Oksidacija aminokislinskih oseb |
LC-MS, obratna faza visoko učinkovite tekočinske kromatografije (RP-HPLC) ali hidrofobna interakcijska kromatografija visoko učinkovite tekočinske kromatografije (HIC-HPLC) in masna spektrometrija |
Analitične postopke
1. Priprava vzorca
2. LC-MS
3. Analiza podatkov
Aminokisline tryptofan (Trp) so zlasti občutljive na oksidacijo zaradi visoke reaktivnosti aromatičnega indola z reaktivnimi vrsticami kisekline. Oksidacija Trp zahteva nekaj izpostavitev Trp aminokislin, ki so običajno skrite v tridimenzionalni strukturi proteina.
Vendar pa se, ko se Trp aminokisline oksidirajo, lahko pretvori v različne produkte, ki imajo zelo različne lastnosti od izvirnega Trp. Najpogostejša pot oksidacije Trp vključuje oblikovanje N-formilkineurina (Razlika v masi: +32).
Druga pogosto oksidirana aminokislina je metionin. Sulfurski atom v Met aminokislini lahko sprejme eno ali dve kisiklinske atome, kar pripelje do oblikovanja sulfovida (Razlika v masi: +16) ali sulfona (Razlika v masi: +32), odgovarajoče. Ta sprememba je relativno pogosta zaradi tipično visoke površinske izpostavitve Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
