Клучни ензими за долготрајно производство на РНК
mRNA, како вид на долга кодирана РНК, се изведуваше безбедно и ефикасно кај поширок опсег на луѓе за време на СОВИД-19. Други долгокодирачки РНК, како што се самозасилувачка РНК (саРНК) и кружна мРНК (цирцРНК), исто така покажаа ефикасност во предклиничките и клиничките студии.
Големото производство на долгокодирачка РНК се потпира на ин витро транскрипција (IVT) преку неколку ензимски реакции. Чекорите на производство на РНК вклучуваат подготовка на шаблон ДНК, синтеза на ИВТ РНК, циркулација, отстранување на ДНК, модификација на РНК (затворање и опашка) и прочистување на РНК.
Постојат неколку клучни ензими кои се користат во долгокодирачкото производство на РНК (на пример, mRNA, saRNA и circRNA), вклучувајќи рестриктивни ендонуклеази, T7 RNA полимераза (T7 RNAP), инхибитор на RNase, неорганска пирофосфатаза, DNase I, ензим за покривање на вакцини и RNase R.
Процесот на
|
Ензим
|
функција
|
Подготовка на шаблон ДНК
|
Рестриктивни ендонуклеази
|
Линеаризација на плазмидната ДНК (pDNA) за да се избегне генерирање подолг транскрипт.
|
Синтеза на ИВТ РНК
|
T7 RNA полимераза (T7 RNAP)
|
Поврзете се со промоторот Т7 и генерирате специфичен транскрипт на РНК; Играјте клучна улога за време на реакцијата на ИВТ.
|
Инхибитор на RNase, рекомбинантен
|
Инхибирајте ја активноста на RNase за време на IVT реакцијата.
|
Пирофосфатаза, неорганска (iPPase)
|
Спречете го пирофосфатот за време на IVT реакција.
|
Отстранување на ДНК
|
DNase I
|
Отстранете ја шаблонот за ДНК.
|
Модификација на РНК
|
Ензим за покривање на вакцини
|
Додадете Cap1 структури на 5' краевите на IVT mRNA.
|
2'-О-метилтрансфери
|
збогатување на circRNA |
RNase R |
Дигестирајте ја линеарната РНК и збогатете ја кружната РНК. |
Yaohai Bio-Pharma нуди еднократно CDMO решение за ензими