Со брзиот развој на mRNA вакцините и терапевтските средства, потребен е специфичен панел на методи за анализа за тестирање на потенцијата (дефинирање на нивната биолошка активност), вклучувајќи ја транслационата ефикасност на mRNA. Овие методи обично се засноваат на клеточна трансфекција и функционални анализи на целниот протеин.
Yaohai Bio-Pharma нуди клеточни анализи на моќ за mRNA лекови или производи од LNP, вклучително и клеточна трансфекција (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 клетки, итн.) и ELISA или Western Blotting (WB) анализи.
Според регулаторните размислувања на СЗО, „Потенцијата на секоја група од финалната вакцина треба да се одреди со користење на соодветно квантитативни и потврдени функционални методи. Потенцијалните ин витро анализи на потенција може да вклучуваат системи за трансфекција базирани на клетки или анализи без клетки“. И USP препорача „клеточна анализа“ за тестирање на моќта на mRNA, т.е. изразување на целниот протеин.
Анализа |
Методи |
Испитувања на потенција |
Трансфекцијата базирана на клетки и целниот протеин идентификуваат: 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 клетки, итн. |
Чекор 1. Трансфекција базирана на клетки со mRNA или mRNA-LNP
Клетките се култивираат и трансфектираат со mRNA или mRNA-LNP. Детално, mRNA се трансфицира откако ќе се измеша со реагенс за трансфекција, додека mRNA-LNP директно се трансфицира во клетките. По 24-48 часа, прочистете го супернатантот што го содржи изразениот протеин со центрифугирање.
Чекор 2. Функционални анализи на целниот протеин
Изведете ELISA или WB анализи за да го процените функционалното врзување на целните протеини.
Клеточни анализи на моќ на примероци од mRNA
Yaohai-BioPharma има развиено клеточно-базирана метода за анализа на моќноста за mRNA, која вклучува клеточна култура, клеточна трансфекција и протеински функционални анализи. Трансфициравме eGFP mRNA, mCherry mRNA, луцифераза mRNA, шилести протеин mRNA во 293T клетки и откривме цел протеин преку флуоресцентен, луминисцентен или обоен сигнал, WB, ELISA.
Анализи на моќ засновани на клетки на производи од mRNA од Yaohai Bio-Pharma