Со оглед на масовното производство на mRNA, транскрипцијата во тестерот (IVT) е поефикасна и повеќе одрефинирана метода. Реакцијата IVT ја користи линеаризираната плазмидна DNA што содржи T7 промотор како темплат и mRNA се синтезира со употреба на нуклеозид трифосфати (NTPs) како субстрати при присуство на T7 RNA полимераза.
Модификацијата на нуклеотидите е прорив во истражувањето на mRNA, каде што немодифицираните молекули на mRNA се препознаваат од интракелуларни сензори за РНК за да активираат вгравена имунитет. За размислување за имуногеноста на mRNA и ефикасноста на преводот во живо тело, процесот на IVT обично користи одредени видови модифицирани НТП-и, а често употребувани модифицирани нуклеотиди се псеудоуртин (Ψ), N1-метил-псеудоуртин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Процесот на транскрипција во тестерот на mRNA
Дијаграм на реакцијата на транскрипција во тестерот (IVT)
Детали за Услугите
Опционална Услуга |
Детали за услугата |
Период на Издржувачење (работен ден) |
Транскрипција во vitro (IVT) |
IVT, Транскрипција во тестерот |
1 |
| Модификација на нуклеотиди (Ψ/N1Ψ/5mC, итн.) |
| Отстранување на ДНК темплет (ДНаза I) |
Оптимизација на условите за IVT - опционално |
Дизајн и оптимизација на IVT реактивни компоненти |
2-5 |
Нашите карактеристики
- Разновидни стратегии за модификација на нуклеотидите
Подобрување на стабилноста на мРНК и експресијата на протеин во живо.
- Строга Тест Дизајн и Оптимизација
припремка на мРНК фрагменти до 10kb може да се постигне.
Со оптимизација на IVT реактивни услови, скороста на транскрипцијата е до 1:200.
Строгата контрола на РНазе преку експериментална средина и потрошувачки може да предизвества ефективно одголемување на мРНК.
Студија на случај
Сегашниот систем за ИВТ реакција е приближно оптимизиран за синтетички системи со должина од околу 100 нт, не за мРНК на произволна должина. Што е подолга мРНК секвенца, толку е трудно да се транскрибира и толку е склонна на одголемување.
За да се припремат прилагодени мРНК секвенци со должина од околу 10 кб, компанијата Yaohai Bio-Pharma успешно ги припремила висококвалитетните примероци со висок ратио на транскрипција од 1:135 и добиле 135 μg од почетно очиштени мРНК производи след што 1 μg линеаризиран плазмид беше транскрибиран во експериментален услов преку строг експериментален дизајн, непрекината оптимизација на условите за реакција и струга контрола на РНазе.
идентификација на мРНК (Агарозна Гел Електрофореза)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
