Yaohai Bio-Pharma ги подготвува circRNA-то базирани на системот PIE (поравнување на ексони и интрони), што се надоверува на самостоената функција на сплицирање на тип I интрони за да се постигне цикличност на RNA. Структурата на PIE е дизајнирана користејќи ген T4 td или предшествувачки ген fishy tRNA, а редоследот е следниов:
РНК интронот и поддржувачкиот ексонски дел се делиат на два дела (5' терминал и 3' терминал), каде што секвенцата на 5' терминал се пренесува на крајот на целевата секвенца, секвенцата на 3' терминал се вметнува пред целевата секвенца, а целевата генска секвенца се вметнува во средината.
Под катализа на GTP, структурата PIE води до циклизација на секвенци други од интроните. Комбинирано со разумна стратегија за подобрување на ратето на циклизација, Yaohai Bio-Pharma може да постигне циклизација на секвенци до 4 kb со рате на циклизација повисок од 80%.
Слика 1. Ин витро циркулација на circRNA bazirana na системот PIE
Детали за Услугите
| Процес |
Опционална Услуга |
Детали за услугата |
Период на Издржувачење (работен ден) |
| дизајн и оптимизација на секвенци на circRNA |
Дизајн и оптимизација на кодирачките секвенци |
Поравнање на CDS секвенца
Оптимизација на CDS кодони
|
1 |
| Дизајн и оптимизација на не-кодирачki секвенци |
Дизајн и оптимизација на интронски и екзонски низови
Дизајн и оптимизација на хомологични арми низови
Дизајн и оптимизација на спейсерски низови
|
1-2 |
Обични стратегии за дизајн на mRNA последователност
| Компоненти на CircRNA |
Биолошки функции |
Стратегии за оптимизација |
| Двотермinalни интронски и екзонски низови |
GTP-каталитски самосплетување на интрон за циклирање на низовите вонешен од интронот. |
Дизајниран според генот T4 td или предшественикот на тРНК од рибја маслINA. |
| Кодирање |
IRES |
Внатрешен сайт за препознавање на рибозомот што регулира преводот на циркRNA. |
Селекција на секвенци од внатрешен сайт за влез на рибозом (IRES) од различни вируски извори, напр. EMCV, CVB3 извори. |
| CDS |
Региони кои кодираат протеини, секвенци кои кодираат антигени, антитела или други функционални протеини. |
Оптимизацијата на кодони зголемува нивото на превод; некои неоптимални кодони можеби имаат улога во складирањето на протеините. |
| Не-кодирачки |
Не-кодирачки секвенци |
Цел miRNA или протеини за да се оствари регулација на генот или протеинот. |
Целосење на специфични врвови за миРНК или протеини може да повторува секвенците на врвот за врзuvање. |
Нашите карактеристики
- Оптимизиран систем за циклизација PIE со разумни оптимизациони стратегии за постигнување на степен од циклизација повеќе од 80%;
- Соопштување со екип за оптимизација на CDS во соработка со професионален екип за алгоритми на ИВ за завршување на оптимизацијата на кодоните во регионот CDS;
- Зрел и савршен процес circRNA може да се постигне со висока ефикасност на циклизација, висока стабилност и висока ефикасност на транслација.
Студија на случај
Yaohai Bio-Pharma ја започна контролната производена зелена флуоресцентна белка (eGFP) circRNA, која се базира на системот PIE за постигнување на циклизација на РНК.
Со користење на конвенционален реагент за трансфекција, eGFP circRNA се трансфектира во клетките 293T, и след 24 часа може да се детektira флуоресцентен сигнал на eGFP (зелено), кој ќе се зголеми след 48 часа. Флуоресцентниот сигнал може да се детектира и на седмия ден и на четирдесетиот ден по трансфекција.
Валидација на изразот на eGFP circRNA in vitro
MK
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
UR
BN
