карањето на 5'-край е суштинска модификација на mRNA. mRNA-то со карактеристични кап структури, особено Cap1 структури, го олеснува да избегнува природните имунолошки одговори во живот, што доводи до ефикасна превод на протеин.
Ензимската карапура (двуэтапната метода) е традиционалната метода за карапура на mRNA, слична на процесот на карапура во евкариотски организми. Под дејството на серија ензими, 7-метилгуанин (m7G) се поврзува со 5'-край на mRNA преку 5'-5' трифосфатен врв и претерва метилациона модификација за да формира кап структурата Cap 1 (m7GpppN).
Дијаграм на формирање на природната кап структура
Потокот на ензимската карапурна реакција е како следи:
Линеаризираната плазмидна ДНК се користи како шаблон за транскрипција во vitro (IVT) при присуство на T7 полимераза, и мРНК со 5' капова структура се формира по едночленска чистење користејќи вакцинијски капен ензим и 2'-O-метилтрансфераза.
Детали за Услугите
Опционална Услуга |
Детали за услугата |
Период за достава (Ден) |
ензимска капирање на mRNA |
Ензимска капова реакција |
1 |
Оптимизација на капова реакција - опционално |
Дизајн и оптимизација на реактивните компоненти |
3~7 |
Нашите карактеристики
- Дизајн и оптимизација на компонентите на капова реакција
Компонентот за капирање е оптимизиран, а производството на mRNA транскрипт е значително зголемено.
- Верификација на изразот во vitro
Капираната mRNA се трансферира во 293T клетки, и изразот на целната белчинка може да се детектира.
Преку строга контрола на RNase во експерименталната средина и конзуматите, деградацијата на mRNA е ефективно спречена.
Студија на случај
Платформата за mRNA на Yaohai Bio-Pharma го создала савршен процес за капирање.
За eGFP mRNA, пред-продукт на mRNA припремен со ензимско капирање, потоа што се трансферираат 293T клетки за 24 часа, може да се набљудува силен електричен сигнал (зелена флуоресценција) кој е детектиран со Western Blot (WB), што покажува дека целната белчинка, зголемената зелена флуоресцентна белчинка (eGFP), може да се изрази ефикасно во vitro.
Израз на ензимски капирана eGFP mRNA во 293T клетка
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
