Споредено со двостепеното ензимско капирање, методот на едностепено ко-транскрипциона капирање може значајно да го сmanува процесот. Овој метод е резултат-ориентиран и вклучува додавање на кап аналоги во реакцијата на транскрипција во vitro (IVT). Кап аналогите можат да се воведат од самото почеток на транскрипцијата, а мРНКа со кап структура се добива при завршувањето на транскрипцијата. Со текот на моментовите кап аналоги од третата генерација можат да избегнуваат обратно капирање и директно да додадат Cap 1 структура на транскрипциониот продукт.
За размислување за имуногеноста на mRNA во живо и ефикасноста на преводот, процесот на IVT често користи одредени видови модифицирани НТП-и, а обичните модифицирани нуклеотиди се псеудоуридин (Ψ), N1-метил-псеудоуридин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Слика: Дијаграм на ко-транскрипционата реакција на mRNA и капирање
Детали за услугата
Услуга |
Детали за услугата |
Период на Издржувачење (работен ден) |
Ко-транскрипционо капирање |
Преобразба во vitro (Чист кап аналог) |
1-2 |
| Модификација на нуклеотидите (Ψ/Н1Ψ/5мЦ) |
| Отстранување на ДНК темплет (ДНаза I) |
Оптимизација на условите за IVT - опционално |
Дизајн и оптимизација на реактивните компоненти |
3-7 |
Нашите карактеристики
- Разновидни стратегии за модификација на нуклеотидите
Многу опционални стратегии за модификација на нуклеотидите можат да подобрат изразувањето на протеините.
- Оптимизиран реакционен систем
Достигнете висок ратио на транскрипција и висока ефикасност на капирање.
- Стабилен процес на капирање
Достигнете капирачка стапка од повеќе од 95%.
Превенција на деградацијата на mRNA ефективно со строга контрола на RNase во експерименталната средина и потрошувачки материјали.
Студија на случај
Yaohai Bio-Pharma ја создаде зрелата платформа за сопствено капирање, користејќи чисти кап аналоги за директно додавање на Cap1 структура, при што се избегнува обратно капирање. Потоа, со стандардизирана предобработка на примероци и детекција со капиларна електрофореза (CE), капирачката стапка на mRNA на зголемената зелена флуоресцентна белчинка (eGFP) може да достигне повеќе од 95%.
ефикасноста на капирање на еГФП мРНК е повеќе од 95%
ЕГФП мРНК и мЧерри мРНК приготвените со ко-транскрипционално капирање се трансфектираат во клетки 293T, ресpectively, и се набљудува јак флуоресцентен сигнал по 48 часа, што sugerira дека мРНК е ефикасно изразена во клетките 293T.
Израз на еГФП мРНК и мЧерри мРНК во клетките 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
