Значењето на Развојот на Горен Процес
Горниот процес (USP), исто така познат како ферментациона процес, е еден од почетните фази на горниот биопроцес. Микробијалниот процес на ферментација е критичен за високадензитетната култура на ќелии и изразувањето на спољни гени, што директно влијае на добивката и цената на биолошките производи.
Во раните фази на развојот на биолошките производи (предклинички или фаза 1/2), фокусот е да се развијат масштабируеми процеси без употреба на животни со средна добивка и да се задоволат сите стандарди за квалитет на производот.
Додека во последните фази (фаза 3 или комерцијална), ќе се фокусираме на отдавање, робустност, скалабилност и воспроизводивост, креирајќи процес кој е ефикасен од гледна точка на трошоци. Дејности кои ги обработуваат овие прашања се карактеризација на процесот и студии за валидација на процесот. Истовремено, инструментите за квалитет по дизајн (QbD) и дизајн на експерименти (DoE) обично се применуваат.
Клучни зборови: развој, оптимизација и валидација на процес, процес на ферментација, микробијална клетка ферментација, бактериска ферментација, мајчина ферментација, ферментација со висока густина, инженерска штампа ферментација
Апликација: Биофармацевтички индустрија, хуман медицина, животински медицина, ваксини, рекомбинантни големи молекули биолошки, рекомбинантни биолошки, биолошки реагент
Решенија USP на Yaohai Bio-Pharma
Бенефицирајќи од повеќе од 10 години искуство во микробијалната ферментација, Yaohai Bio-Pharma има знаење да помогне да се реши прашањата поврзани со ферментациониот процес. Можеме брзо да создадеме стратегии за ферментација со висока густина за Escherichia coli (E. coli) секреција во периплазматичниот простор, интракелуларно раствориво изразување или изразување како инклузионски тела, како и екстрацелуларно или интракелуларно изразување на јак.
Нашиот расположив општи услуги за развој на ферментација вклучуваат:
- Дизајн на ферментациониот процес извршен во мал масштаб од 7Л во режим на фид-батч
- Валидација на три партии процес во ферментери од 7Л
- Промена на меѓумасовниот процес до 30Л/70Л
Можеме гиgreso да извршиме многупараметарска оптимизација за да се задоволи желениот улог или пропорција, користејќи One-Time-A-Factor (OTAF) или Design-of-experiments (DoE).
Клучните параметри на ферментацијата се прикажани како следи:
Состави на ферментациони медиум без животни штетници
Без antibiotici или со antibiotici, Инокулум обем
Температура на растечување, pH, Ниво на дисолвиран кислород (DO)
Начин на хранење (нпр., fed-batch)
Концентрација на индуктор (нпр., IPTG, метанол), Точка на индуцирање (мокра маса на клетки/OD600),
Температура на индуцирање, Време на индуцирање
и т.н.
Детали за услугата
| Услуги |
Технологијски постапка |
| Растеж во шейк фласк (500 мл) |
Припрема на медиум без животни компоненти → Растечување на микробен сид → Растечување во шейкер → Индуцирање → Харвестирање |
| Растечување во ферментер (7 л) |
Припрема на медиум без животни компоненти → Растечување на микробен сид → Ферментација со висока густина на клетки во 7л биореактор → Индуцирање → Харвестирање |
| Контрола на квалитетот на протеините/пептидите |
Претпраработка Изразување на растворливи интракелуларни белци: Харвестирање и ресуспензија на микробни клетки → Ултразвучно дробење → Премахнување на клеткови отпадоци → Примарен екстракт Изразување на инклузивни тела: Харвестирање и ресуспензија на микробни клетки → Ултразвучно дробење → Припрема на инклузивни тела → Примарен екстракт Изразување на екстрацелуларни растворливи белци: Собирање на културен супернатант → Концентрирање и замена на буфер → Примарен екстракт Анализа на квалитет Примарен екстракт како примерок → Анализа на целната белка со SDS PAGE или западен блотинг (WB) |
| Контрола на квалитетот на плазмидите |
Претпраработка и анализа на квалитет Екстракција на плазмиди → Анализа на ДНК со агарозна гел електрофореза |
Студија на случај
Нам се порача од нашите клиенти да зголемиме износот на целното полипептидно hormon од 8 g/L до 10 g/L.
На основа на Полната Факторна Дизайн и Површинскиот Одговорен Дизајн во инструментите за DoE, брзо ги препознаевме и оптимизирахме клучните параметри на ферментацијата. Под оптимизираното процес на ферментација со висока густина на ќелии, нивото на израз се зголеми до 10 g/L.
Нашите искуства
- Работевме со различни видови микробни хостови, например, E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) и Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Имаме искуство со Е. coli секреција во периплазматичниот простор, растворлива експресија и експресија преку инклузивни тела, како и јастреbose интерцелуларна или екстрацелуларна експресија. Производноста на инклузивните тела може да достигне до 10г/Л, додека производноста на растворливите протеини се намира меѓу 0.5 до 15г/Л.
- Бевме вовлечени во развојот и производството на различни големи молекули, вклучувајќи рекомбинантни субјединични вакцини, вируски пописни честички (VLPs), hormoni (insulin, GLP-1, growth hormone), цитокини (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), растбени фактори (EGF, FGF, NGF), nanobodies/ single-domain antibodies (sdAbs), ензими, итн.
- Уред
7Л*16 Ферментациона систем
Cedex Bio Анализатор, Биопроцесен анализатор
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
