Профилирањето на N-гликаните е од суштинско значење за производство на биофармацевтски препарати. Yaohai Bio-Pharma обезбедува услуга за профилирање на N-гликан користејќи Течна хроматографија-масна спектрометрија (LC-MS) на ослободени и означени гликани. Општите чекори за подготовка на примерок од N-гликани вклучуваат дигестија на гликопротеинот (GP), де-гликозилација, прочистување, означување/дериватизација и екстракција на цврста фаза (SPE).
Вклучени сме во протеинската структурна карактеристика на различни големи молекули, вклучувајќи вакцини за рекомбинантна подединица, нанотела/VHHs/ Антитела со еден домен (sdAbs), фрагменти на антитела, хормони/пептиди, цитокини, фактори за раст (GF), ензими, итн.
Регулаторни барања за профилирање на Н-гликан
Според упатствата на ICH Q6B, „за гликопротеините, се одредува содржината на јаглени хидрати (неутрални шеќери, амино шеќери и сиалични киселини). Дополнително, структурата на синџирите на јаглени хидрати, шемата на олигосахаридите (антенарниот профил) и местото(ите) на гликозилација на полипептидниот синџир се анализираат колку што е можно.
Аналитички метод
Анализа |
Методи |
Н-гликанско профилирање |
Течна хроматографија-масовна спектрометрија (LC-MS) анализа на ослободени и означени гликани |
Процедури
1. Ензимско ослободување на гликан со пептид N-гликозидаза F (PNGаза F)
2. Дериватизација на ослободените гликани со 2-аминобензамид (2-AB)
3. Прочистување на собраните N-гликани на колона TSK Amide - 80 доколку се присутни големи количества детергенти, неиспарливи соли или материјали со слободни амино групи
4. Означување со флуоресцентен 2-аминобензамид (2-AB)
5. LC-MS анализа на означени N-гликани
6. Анализа на податоци