N-glikozilacijskata заемност на местата е физиолошки карактеристичен признак на гликопротеините и главно произведува N-гликозан. Анализот на N-glikozilacijskata заемност на местата што го осигурвува Yaohai Bio-Pharma се извршува преку дигестија, ослободување, обогатување и анализа користејќи Хидродинамичка Хроматографија-Електроспрей Ионизација Масов Спектрометрија-Масов Спектрометрија (LC-ESI-MS/MS).
Бевме вклучени во карактеризацијата на структурата на протеините на различни големи молекули, вклучувајќи ги Рекомбинантните Подединични Вакцини, Нанотела/ВХХ-ови/ Едно домейн Антитела (sdAbs), Одрезоци на Антитела, Хормони/Пептиди, Цитокини, Фактори за Растав (ФР), Ензими, Колаген, итн.
Регулаторни Заhtеви за N-glikozilacijska заемност на местата
Според насоката ICH Q6B, „за гликопротеините, се определува врсина на углеводите (нeутрални шeгpи, аминoшeгpи и cиалични киселини). Понатаму, структурата на цеповите на углеводите, олигосахаридниот патерн (антенски профил) и локациите на гликозилациjата на полипептидниот цеп се анализираат нaјдобро колку е можно.“
Аналитички метод
| Анализа |
Методи |
| Заполнување на локуси за N-гликозилација |
ХPLC-МС по дегликозилациjа и пептидна дигестциjа |
Процедури
1. Пептидна дигестциjа на протеините за да се генерираат мали пептидни фрагменти.
2. Ослободување на N-гликани користејќи ендогликозидаза H или PNGase F. Ендогликозидаза H секира врската помеѓу двата резидууми на GlcNAc во јадрото на N-врзени гликани, додека PNGase F е гlicoамидаза која секира врската помеѓу GlcNAc и Asn, ослободувајќи целата цеп на шеќер и трансформирајќи Asn во Asp со зголемување на масата за 1-Da.
3. Обогатување на N-гликопептидите преку HILIC (Хидрофилно Интеракциона Ликвидна Хроматографија)
4. Анализа на окупациjата на N-врзена гликозилациjа со употреба на LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
