Податоците од хроматографија на течности-масовна спектрометрија (LC-MS) базирани на картирање на пептидите ќе донесат голем број информации за примарната и високоредоследната структура на природните и рекомбинантни протеини, вклучувајќи ги покривеноста на аминокиселините, пост-транслационалните модификација (ПТМ, напр. гликозирање, оксидација, деамидација), ди суфидни вези, итн.
Yaohai Bio-Pharma нуди услуги за анализа на картирање на пептидите за целевиот протеин со помош на LC-MS, за да го убрza истражувањето врз структурата на протеините.
Бевме вклучени во карактеризацијата на структурата на протеините на различни големи молекули, вклучувајќи ги Рекомбинантните Подединични Вакцини, Нанотела/ВХХ-ови/ Едно домейн Антитела (sdAbs), Одрезоци на Антитела, Хормони/Пептиди, Цитокини, Фактори за Растав (ФР), Ензими, Колаген, итн.
Регулаторни Заhtеви за Картирање на Пептидите
Рачник ICHQ6B препорачува: „Селективно раздробнување на производот во дискретни пептиди се извршува користејќи приклопени ензими или хемикалии, а резултатните пептидни фрагменти се анализираат со ХПХЦ или друг приклопен аналитички постапок. Пептидните фрагменти треба да се идентификуваат што е можно повеќе, користејќи техники како што се анализа на аминокиселината, N-терминална секвенцирање или масовна спектрометрија (МС). Пептидното картирање на активното вещество или лекарскиот производ (ЛП) користејќи приклопено валидирани методи е често користена метода за потврдување на желаната структура на производот за освободување на партија.“
Аналитички методи
| Анализа |
Методи |
| Пеptидно Картирање |
Протеазно дигестирање и течна хроматографија-масовна спектрометрија (ТХ-МС) |
Аналитичка процедура
1. Редукција и алкилација
Целта е да се намали бројот на ди суфидни мостови и да се блокира генерираното слободно тиол. Намалувањето на ди суфидните мости помага за отварање на протеинската структура, што прави протеолитичката дигестација поефикасна. Овој чекор ќе разбие и мостовите меѓу ланците во случајот на многуланчани протеини кои имаат ди суфидни мости што ги врзуват ланците (нпр. моно克лонални антитела, mAbs).
2. Дигестација на протеинот користејќи ензими
Целта е да се разложи протеинот во пептиди. Изберавме ензимите според теоретичкиот редослед на протеинот и знаењето за теоретичката дигестација на протеинот од страна на ензимите. Изборот на ензими во овој начин треба да доведе до најдобриот анализа на пептидска карта.
3. Анализа на дигестираните пептиди Користејќи Он-лайн Реверзна Фаза-Високо Ефикасен Хроматографски Апарат со Ултравиолетен (UV) и Електроспрей-Маса Спектрометриски Детекција (LC/ES-MS).
Сeparacion на пептидите според polarity користејќи LC (реверзна фаза-LC)
Додека пептидот се елютира од колоната на ХП, масовиот спектрометар ќе генерира масова информации заедно со информации за фрагмент-ioni, што ни овозможува да определиме секвенчните информации. Користиме ги секвенчните информации за потврда на идентитетот на пептидот и за да дадеме првични информации.
Можеме исто така да генерираме информации за фрагментација од пептидите додека влегуваат во изворот на масовиот спектрометар од колоната на ХП. Според барањата на истражувањето, тоа е или selektivno LC-MS/MS или non-selektivno, што може да се разгледа како форма на тандемен МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
