Рекомбинантните протеини често ја гледаат оксидацијата на изложените странични синџири на аминокиселини, како што се триптофан (Trp) и метионин (Met), менувајќи ги физичко-хемиските својства на протеините. Овие промени може да придонесат за промена на биолошките функции на засегнатите протеини, како што се губење на врзувањето, намалување на ензимската активност, неочекувано брз клиренс. Протеините се важни цели за оксидативните реакции бидејќи тие брзо реагираат со оксидантите и ги има во изобилство во клетките, екстрацелуларните ткива и телесните течности.
Затоа, следењето на оксидацијата на протеините е критично за успешен биофармацевтски развој.
Yaohai Bio-Pharma нуди услуга за анализа на оксидација на аминокиселини, која ви овозможува да ја одредите оксидацијата на аминокиселините со течна хроматографија-масена спектрометрија (LC-MS).
Вклучени сме во протеинската структурна карактеристика на различни големи молекули, вклучувајќи вакцини со рекомбинантна подединица, нанотела/ VHHs/ антитела со еден домен (sdAbs), фрагменти на антитела, хормони/пептиди, цитокини, фактори за раст (GF), ензими, итн.
Регулаторни барања за оксидација на аминокиселини
Според упатствата на ICH Q6B, оксидираните форми може да се детектираат и карактеризираат со хроматографски, електрофоретички и/или други релевантни аналитички методи (на пример, течна хроматографија со високи перформанси (HPLC), капиларна електрофореза, масена спектроскопија, кружен дихроизам).
Аналитички методи
| Анализа |
Методи |
| Оксидација на аминокиселини |
LC-MS, течна хроматографија со високи перформанси со обратна фаза (RP-HPLC) или хидрофобна интеракциона хроматографија со течна хроматографија со високи перформанси (HIC-HPLC) и масена спектрометрија |
Аналитички процедури
1. Подготовка на примерок
2. LC-MS
3. Анализа на податоци
Остатоците од триптофан (Trp) се особено склони кон оксидација поради високата реактивност на ароматичниот индол со реактивни видови на кислород. Оксидацијата на Trp бара одредена изложеност на остатоци од Trp кои вообичаено се закопани во тродимензионалната структура на протеинот.
Меѓутоа, кога остатоците од Trp се оксидираат, тие можат да се трансформираат во различни производи со многу различни својства од оригиналниот Trp. Најчестиот пат за оксидација на Trp вклучува формирање на N-формилкинуренин (Разлика во масата: +32).
Друга најчесто оксидирана амино киселина е метионин. Атомот на сулфур во остатокот од Met може да прифати еден или два атоми на кислород што доведува до формирање на сулфоксид (разлика на масата: +16) или сулфон (разлика во маса: +32), соодветно. Оваа модификација е релативно честа поради типично високата површинска изложеност на Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
