Кружна mRNA (circRNA) е широко користена во проучувањето на функциите на гените или протеините. Во меѓувреме, таа е популарна во развојот на профилактички и терапевтски биолошки средства, слични на mRNA.
Јаохаи Био-Фарма воспостави сет на технологии за синтеза на цирцРНК за да обезбеди висококвалитетна РНК, како што се дизајнирање и оптимизација на секвенците, транскрипција ин витро (IVT), циркуларизација/циклизација, прочистување и енкапсулација на липидни наночестички (LNP). Сите производи се издаваат според строгите стандарди за контрола на квалитетот (QC).
Во споредба со линеарната мРНК, кружната РНК (циркРНК) е постабилна во структурата и е главна жешка точка во тековното истражување на лекови за нуклеинска киселина. Има широк спектар на апликации во различни области, без разлика дали е кодирање на circRNA или некодирачка circRNA, вклучувајќи профилактички вакцини за заразни болести, терапевтски онколошки вакцини, терапевтски онколошки лекови, терапија за замена на протеини, регенеративна медицина, клеточна и генска терапија (CGT) , улога на молекуларен сунѓер и РНК аптамер.
Процесот на | Факултативна услуга | Детали за услугата | Период на испорака (ден) |
Дизајн и оптимизација на секвенци на circRNA | Дизајн и оптимизација на секвенци за кодирање | Оптимизација на кодони на ЦДС | 1 |
Дизајн и оптимизација на секвенци кои не се кодираат | Секвенца на интрони и егзони, дизајн и оптимизација на хомологни краци и простори | 1-2 | |
Кружна плазмидна подготовка | Синтеза на гени | Синтеза на гени (трета страна) | 7-10 |
Плазмидно засилување | Плазмидно засилување | 2 | |
Екстракција на плазмиди | |||
Линеаризирана плазмидна подготовка | Линеаризација и прочистување на плазмидите | Плазмидна линеаризација | 1 |
Линеаризација Прочистување на ДНК | |||
Ин витро транскрипција и циклизација | Ин витро транскрипција и циклизација | Ин витро транскрипција и реакции на циклизација | 1-2 |
RNase R Дигестија | |||
Оптимизација-опционално | Состав на реакција, оптимизација на време | 2-5 | |
Прочистување на circRNA | Конвенционален метод на прочистување | Врнежите на литиум хлорид | 1 |
Прочистување со магнетна мушка | 1 | ||
Високо чисто прочистување на circRNA | Препаративна течна хроматографија со високи перформанси (HPLC) | 1-2 | |
Баферска размена | Ултрафилтрација | 1 | |
circRNA лиофилизација | Пополнување на примерок | Пополнување | 2-3 |
Лиофилизација | Пред-замрзнување | ||
Примарно сушење (сублимација) | |||
Секундарно сушење (десорпција) | |||
circRNA-LNP Енкапсулација | LNP енкапсулација | Материјал и течен предтретман | 2 |
Мешање на микрофлуидни уреди | |||
Баферска размена | Филтрација на тангенцијален проток | 1 | |
стерилизирани | Филтрација | ||
Контрола на квалитет на плазмидната ДНК | Концентрација/чистота | Ултравиолетова (УВ) спектрофотометрија | 1-2 |
Плазмидна конформација | Електрофореза со гел агароза (AGE) | ||
Капиларна електрофореза (СЕ) - по избор | |||
Плазмид се идентификуваат | Идентификација на рестриктивни ензими / AGE | ||
Контрола на квалитет на circRNA | Концентрација/чистота | Ултравиолетова (УВ) спектрофотометрија | - |
Чистота | Електрофореза со гел агароза (AGE)/Е-гел | 0.5 | |
HPLC-опционално | 1 | ||
Контрола на квалитет на circRNA-LNP | Ефикасност на капсулирање | РибоГрин метод | 1 |
Големина на честичка | Динамичко расејување светлина (DLS) | 1 | |
Индекс на полидисперсност | Динамичко расејување светлина (DLS) | 1 | |
Зета потенцијал | Динамичко расејување светлина (DLS) | 1 | |
Анализа на потенција базирана на клетки | Трансфекција на клетки | Позлата на клетките, клеточна трансфекција | 4 |
Откривање на целни протеини | Набљудување на флуоресценција, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Трансфициравме зголемен зелен флуоресцентен протеин circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, луцифераза circRNA во 293T клетки и откривме цел протеин преку флуоресценција, луминисцентен или сигнал во боја, вестерн блот (WB), ензимски имуносорбентен тест (ELISA).
Анализи на моќ засновани на клетки на примероци од circRNA од Yaohai Bio-Pharma