Sleutel-ensieme vir lang-RNA-produksie
mRNA, as 'n tipe lang kodende RNA, het tydens COVID-19 veilig en doeltreffend in 'n groter verskeidenheid mense gevaar. Ander langkoderende RNA's, soos selfversterkende RNA (saRNA) en sirkulêre mRNA (circRNA) het ook doeltreffendheid in pre-kliniese en kliniese studies getoon.
Grootskaalse produksie van langkoderende RNA maak staat op in vitro transkripsie (IVT) deur verskeie ensiematiese reaksies. Die stappe van RNA-produksie sluit sjabloon-DNA-voorbereiding, IVT-RNA-sintese, sirkulasie, DNA-verwydering, RNA-modifikasie (bedekking en stert) en RNA-suiwering in.
Daar is verskeie sleutelensieme wat gebruik word in lang kodende RNA-produksie (bv. mRNA, saRNA en circRNA), insluitend beperking-endonukleases, T7 RNA-polimerase (T7 RNAP), RNase-inhibeerder, anorganiese pirofosfatase, DNase I, vaccinia-beperkingsensiem en RNase R.
proses
|
Ensiem
|
funksie
|
Sjabloon DNA voorbereiding
|
Beperking endonukleases
|
Linearisering van plasmied DNA (pDNA) om te verhoed dat langer transkripsie gegenereer word.
|
IVT RNA sintese
|
T7 RNA polimerase (T7 RNAP)
|
Bind aan die T7-promotor en genereer spesifieke RNA-transkripsie; Speel 'n sleutelrol tydens IVT-reaksie.
|
RNase inhibeerder, rekombinant
|
Inhibeer RNase-aktiwiteit tydens IVT-reaksie.
|
Pyrofosfatase, anorganies (iPPase)
|
Voorkom pirofosfaat tydens IVT-reaksie.
|
DNS verwydering
|
DNase I
|
Verwyder die DNA-sjabloon.
|
RNA modifikasie
|
Vaccinia-beperkende ensiem
|
Voeg Cap1-strukture by die 5′-punte van IVT-mRNA.
|
2'-O-Methyltransferas
|
circRNA verryking
|
RNase R
|
Verteer lineêre RNA en verryk sirkelvormige RNA.
|
Yaohai Bio-Pharma bied eenstop CDMO-oplossing vir ensieme