Die betekenis van stroomaf-proses (ADP)-ontwikkeling
Die hele fermentasiebouillon bevat teikenproteïen of plasmied, sowel as produk- en prosesverwante onsuiwerhede, bv. aggregate, mikrobiese selsubstrate, Gasheerselproteïene (HCP), Gasheersel-DNS (HCD), endotoksien en antibiotika.
Daarom is dit van kardinale belang om 'n doeltreffende DSP, suiweringsproses te ontwerp, om sekere onsuiwerhede te verwyder en hoogs gesuiwerde en hoë kwaliteit geneesmiddelstof te produseer. Boonop kan die optimalisering van die suiweringsproses help om produkherwinning te verhoog, koste te verminder en prosesskaalbaarheid en -reproduceerbaarheid te verbeter.
Sleutelwoorde: prosesontwikkeling, optimalisering en validering, proses van suiwering, chromatografie, eliminasie van onsuiwerhede, HCP verwydering, HCD eliminasie, endotoksien verwydering, proteïen denaturering en hervou, VLP samestelling, vervoeging
Toepassing: Biofarmaseutiese industrie, menslike medisyne, dieremedisyne, entstof, rekombinante grootmolekule biologiese middels, rekombinante biologiese middels, biologiese reagens
DSP-oplossings van Yaohai Bio-Pharma
Ons het uitgebreide ondervinding om teikenproteïene of plasmiede uit komplekse matrikse te isoleer deur stroomaf-suiweringsproses te ontwikkel en te optimaliseer. Daar is verskillende tipes eenheidbewerkings wat geskik is vir die suiwering van biologiese middels, insluitend sentrifugering, filtrasie, homogenisering, alkaliese lise, ultrafiltrasie, presipitasie, proteïendenaturering en hervou, chromatografie, ens.
Ons beskikbare suiweringsontwikkelingsdienste sluit in:
- Ontwikkeling van die hele suiweringsproses vanaf sel- of supernatantversameling tot die finale aktiewe bestanddeel.
- Optimalisering van die suiweringsproses gebaseer op produk- en prosesverwante onsuiwerhede om produkkwaliteit en veiligheid te verhoog, bv. HCP, HCD, endotoksien.
- Definisie en optimalisering van sleutelparameters in een of meer eenheidsbedrywighede, insluitend sellise, tangensiële vloeifiltrering, harsifting, chromatografie, proteïendenaturering en hervou, ens.
- Optimalisering van proses in terme van kwaliteit, opbrengs, herwinning, koste en skaalbaarheid.
- Bekragtiging van die stroomaf suiweringsproses.
- Risikogebaseerde parameterreeksassessering en Ontwerp van Eksperimente (DvO) in prosesmodellering.
Diensbesonderhede
Gestandaardiseerde proteïen- of plasmiedsuiweringsplatforms is gebaseer op veelvuldige ru-suiweringsstappe en minder as 4 chromatografiestappe, insluitend vang, intermediêre suiwering en polering.
| Diensbesonderhede |
Eenheid Bedryf |
Grense |
| Ruwe suiwering |
sentrifugering |
Rotasiespoed, Tyd |
| Hoëdruk Homogenisering |
Totale vaste inhoud, druk, siklusse |
| Deurlopende alkaliese lysis |
Die verhouding van hersuspendeerde selle tot lysisoplossing, lysistyd |
| Tangensiële vloeifiltrering |
Membraanmateriaal en poriegrootte, voervloeitempo transmembraandruk (TMP), filtraatvolume tot membraanoppervlakverhouding |
| neerslag |
Presipitant tipe en konsentrasie, toevoeging, pH, temperatuur, tyd |
| Denaturering en hervou |
Insluiting liggaam proteïen oplosbaarheid |
Denaturerende konsentrasie (bv. ureum, guanidien-HCl, sterk ioniese skoonmaakmiddel), skoonmaakmiddels (bv. natriumdodesielsulfaat, SDS), reduseermiddels (bv. Dithiothreitol, DTT), chelaatvormende middels (etileendiaminetetra-asynsuur, EDTA), temperatuur, tyd |
| Hervou van proteïen |
Hervoumetodes (verdunning, dialise of SEC-hervou), proteïenkonsentrasies, buffers, pH, temperatuur, tyd, oksideer- en verminderingsmiddels (bv. Glutathione, GSH/Oxidized Glutathione, GSSH, DTT/GSSH, Cysteine/Cistine), Kleinmolekule-bymiddels (L-arginien, ureum, guanidien/HCl en skoonmaakmiddels) |
| Vang, tussentydse suiwering en poleer |
AC (affiniteitschromatografie) |
Verskeie tipes chromatografiehars/kolom (bv. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolomlengte en deursnee, buffersamestelling, inspuitvolume, mobiele fasesamestelling (adsorpsie en desorpsie), pH, vloeitempo, binding, Was- en elueringstoestande. |
| IEX (anioon- of katioonuitruilchromatografie) |
| HIC (hidrofobiese interaksiechromatografie) |
| Ontsouting en/of grootte-uitsluitingschromatografie (SEC) |
| RPC (Omgekeerde Fase Chromatografie) |
| MMC, gemengde modus chromatografie |
Gevallestudie
Case 1
Ons het die opdrag om die stroomaf-suiweringsproses te ontwikkel en te optimaliseer om die proteïensuiwerheid van 85% tot 90% te verhoog, terwyl chromatografiestappe verminder word.
Yaohai het 'n robuuste en skaalbare suiweringsproses gelewer met 3 stappe van chromatografie vir die teikenproteïen, 'n bakteriese allergie. En die finale suiwerheid het 95% bereik.
Case 2
Yaohai is deur ons kliënt aangestel om die endotoksienverwyderingsproses van die virusagtige deeltjie (VLP)-entstof te optimaliseer.
Ons span het chromatografie-parameters-optimalisering uitgevoer en 'n geneesmiddelstof met 'n suiwerheid van 98% en endotoksienresidu van 12.8EU/mg voorberei.
Ons ervarings
- Ons was betrokke by die ontwikkeling en vervaardiging van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, VLP's, hormone (insulien, GLP-1, groeihormoon), sitokiene (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), groeifaktore (EGF, FGF, NGF), nanoliggame/enkeldomein-teenliggaampies (sdAbs), ensieme, ens.
toerusting
Ons gebruik toonaangewende AKTA Pure-, AKTA Avant- en Preparative HPLC-stelsels vir die uitvoering van verskeie chromatografiemetodes, insluitend affiniteit, ioonuitruiling, hidrofobiese interaksie, omgekeerde fase en grootte-uitsluitingschromatografie.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
