Die betekenis van stroomop prosesontwikkeling
Stroomop proses (USP), ook bekend as fermentasieproses, is een van die aanvanklike fases van stroomop bioverwerking. Die mikrobiese fermentasieproses is van kardinale belang vir hoëdigtheid selkultuur en eksogene geenuitdrukking, wat die biologiese opbrengs en koste direk beïnvloed.
In die vroeë stadiums van biologiese ontwikkeling (pre-klinies of fase 1/2), is die fokus om skaalbare diervrye prosesse met intermediêre opbrengs te ontwikkel en aan alle produkkwaliteitstandaarde te voldoen.
Terwyl ons in die laat stadiums (fase 3 of kommersieel) is, sal ons fokus op opbrengs, robuustheid, skaalbaarheid en reproduceerbaarheid, wat 'n kostedoeltreffende proses genereer. Die aktiwiteite wat hierdie kwessies aanspreek, is proseskarakterisering en prosesvalideringstudies. Intussen word kwaliteit deur ontwerp (QbD) en ontwerp van eksperimente (DvO) gereedskap tipies toegepas.
Sleutelwoorde: prosesontwikkeling, optimalisering en validering, fermentasieproses, mikrobiese selfermentasie, bakterieëfermentasie, gisfermentasie, hoëdigtheidsfermentasie, gemanipuleerde stamfermentasie
Toepassing: Biofarmaseutiese industrie, menslike medisyne, dieremedisyne, entstof, rekombinante grootmolekule biologiese middels, rekombinante biologiese middels, biologiese reagens
USP Solutions van Yaohai Bio-Pharma
Deur voordeel te trek uit meer as 10 jaar se mikrobiese fermentasie-ervarings, beskik Yaohai Bio-Pharma oor die kundigheid om te help om fermentasieproses-uitdagings op te los. Ons kan vinnig hoë-digtheid fermentasie strategieë vir Escherichia coli (E. coli) periplasmiese afskeiding, intrasellulêre oplosbare of insluiting liggaamsuitdrukking, en Gis ekstrasellulêre of intrasellulêre uitdrukking.
Ons beskikbare algemene fermentasie-ontwikkelingsdienste sluit in:
- Fermentasie proses ontwerp uitgevoer op 'n klein skaal van 7L in voer-batch modus
- Drie-batch proses validering in 7L fermenteerders
- 'n Intermediêre proses skaal op tot 30L/70L
Ons kan buigsaam multi-parameter-optimering uitvoer om die verlangde opbrengs of proporsie te bereik, deur gebruik te maak van One-Time-A-Factor (OTAF) of Ontwerp-van-eksperimente (DvO).
Sleutelfermentasieparameters word soos volg gelys:
Diervrye fermentasie media samestellings
Antibiotika-vry of nie, Inokulum volume
Groeitemperatuur, pH, Opgeloste suurstof (DO) vlak
Voermodus (bv. voer-batch)
Konsentrasie van induseerder (bv. IPTG, metanol), Induksiepunt (sel nat gewig/OD600),
Induksie temperatuur, induksie tyd
ens.
Diensbesonderhede
| Dienste |
Prosesvloei |
| Verbouing in skudfles (500 ml) |
Dierevrye mediavoorbereiding → Verbouing van mikrobiese saad → Verbouing in shaker → Induksie → Oes |
| Verbouing in Fermenter (7 L) |
Dierevrye media voorbereiding → Verbouing van mikrobiese saad → Hoëdigtheid selfermentasie in 7L bioreaktor → Induksie → Oes |
| Gehaltebeheer van Proteïene/Peptiede |
Voorbehandeling Intrasellulêre oplosbare uitdrukking: Mikrobiese selle oes en hersuspensie → Ultrasoniese vergruising → Sel puin verwydering → Ru-ekstrak Insluiting liggaamsuitdrukking: Mikrobiese selle oes en hersuspensie → Ultrasoniese vergruising → insluiting liggaam voorbereiding → Ru-ekstrak Ekstrasellulêre oplosbare uitdrukking: Kultuur-supernatant versameling en versameling ruil → Ru-ekstrak Kwaliteit-analise Ru-ekstrak as monster → Doelproteïen-analise deur SDS PAGE of Western blotting (WB) |
| Gehaltebeheer van plasmiede |
Voorbehandeling en Kwaliteit Analise Plasmiedekstraksie → DNA-analise deur agarosegelelektroforese |
Gevallestudie
Ons kry die opdrag van ons klant om die teikenpolipeptiedhormoonopbrengs van 8 g/L tot 10 g/L te verhoog.
Gebaseer op die volledige faktoriale ontwerp en reaksie-oppervlakontwerp in die DoE-gereedskap, het ons die sleutelfermentasieparameters vinnig herken en geoptimaliseer. Onder die geoptimaliseerde hoëseldigtheid fermentasieproses het die uitdrukkingsvlak tot 10 g/L toegeneem.
Ons ervarings
- Ons het aan verskeie tipes mikrobiese gashere gewerk, bv. E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink-stam 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) en Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
- Ons is ervare met E. coli periplasmiese afskeiding, oplosbare en insluiting liggaamsuitdrukking, sowel as Gis intrasellulêre of ekstrasellulêre uitdrukking. Die opbrengs van insluitingsliggaam is tot 10g/L, terwyl oplosbare proteïenopbrengs wissel van 0.5 tot 15g/L.
- Ons was betrokke by die ontwikkeling en vervaardiging van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, virusagtige deeltjies (VLP's), hormone (insulien, GLP-1, groeihormoon), sitokiene (Interleukin-2/IL-2, IL) -15, IL-21), groeifaktore (EGF, FGF, NGF), nanoliggame/ enkel-domein teenliggaampies (sdAbs), ensieme, ens.
- toerusting
7L*16 Fermentasiestelsel
Cedex Bio Analyzer, Bioproses ontleder
AF
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
MS
BE
MK
UR
BN
