Vloeistofkromatografie-Massaspectrometrie (LC-MS) gebaseerde peptide mapping data sal 'n groot hoeveelheid inligting verskaf oor die primêre en hoër-orde struktuur van inheemse en rekombinante proteïene, insluitend amynsuursekweensdekking, navorstige veranderinge (PTMs, bv. glykosilasie, oksidasie, deamidasie), dissulfiedbande, ens.
Yaohai Bio-Pharma bied peptide mapping analise dienste vir jou teiken proteïeen deur LC-MS, om jou navorsing oor proteïenstruktuur te versnel.
Ons het betrokke gewees by die Proteïenstruktur Karakterisering van verskeie groot molekulêre stowwe, insluitend Rekombinante Subeenheid Vakseen, Nanoliggame/VHHs/En-domein Antibodies (sdAbs), Antibode Fragment, Hormone/Peptide, Sitokine, Groei Faktore (GF), Ensimme, Kollagene, ens.
Reguleringsvereistes vir Peptide Mapping
ICHQ6B riglyne beveel aan: "Selektiewe fragmentasie van die produk in diskrete peptiede word uitgevoer deur geskikte enzime of chemikalië te gebruik, en die resulterende peptiedfragment word geanaliseer deur HPLC of 'n ander geskikte analitiese prosedure. Peptiedfragment moet sover moontlik geïdentifiseer word deur tegnieke soos amynosuursamestellinganalise, N-termynalsekwensering of massaspectrometrie (MS). Peptiedkaart van die aktiewe stof of geneesmiddelprodukt (DP) deur 'n toepaslik gevalideerde metode is 'n metode wat dikwels gebruik word om die gewenste produkstruktuur vir partyskeiding te bevestig."
Analitiese Metodes
| Analise |
Metodes |
| Pepidokaarting |
Protease Digestie en Vloeistofkromatografie-Massaspectrometrie (LC-MS) |
Analitiese Prosedure
1. Reduksie en Alkylasie
Die doel is om disulfiedbruggies te verminder en die gegenereerde vrye tiol te blokkeer. Die vermindering van disulfiedbruggies help om die proteïenstruktur te oopmaak, wat die proteïetieklysie effektiever maak. Hierdie stap sal ook die bruggies tussen die kettings breek in die geval van meerketting-proteïene wat disulfiedbruggies het wat die kettings koppel (bv. monoklonale antilewe, mAbs).
2. Klysie van die Proteïen Met Ensimme
Die doel is om die proteïen in peptiede uiteen te breek. Ons kies die ensimme op grond van die teoretiese volgorde van die proteïen en die kennis van die teoretiese klysie van die proteïen deur ensimme. Deur ensimme op hierdie manier te kies, moet dit lei tot die beste peptiedkaart-analise.
3. Analise van die Geële Peptiede Deur Aanlyn Omgkeerde Fase-Hoë Verrigtingssydig Chromatografie met Ultra-Violette (UV) en Elektrosproei-Massaspectrometriese Deteksie (LC/ES-MS) te gebruik.
Peptiedseparasie gebaseer op polariteit deur middel van LC (omgekeerde fase-LC)
Terwyl die peptiid van die LC-kolom afstroom, sal die massa-spektrometer massa-inligting saam met fragmention-inligting genereer, wat ons in staat stel om die volgorde-inligting te bepaal. Ons gebruik die volgorde-inligting om die identiteit van die peptiid te bevestig en primêre inligting te verskaf.
Ons kan ook die fragmentasie-inligting van die peptiede genereer terwyl hulle die massa-spektrometerbron van die LC-kolom binnengaan. Afhanklik van die eise van die studie, is dit ofwel selektiewe LC-MS/MS of nie-selektiewe, wat as 'n vorm van tandem MS beskou kan word.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
