Vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS) gebaseer peptied kartering data sal 'n groot hoeveelheid inligting verskaf oor die primêre en hoër orde struktuur van inheemse en rekombinante proteïene, insluitend aminosuur volgorde dekking, post-translasie modifikasies (PTM's, bv. glikosilering) , oksidasie, deamidering), disulfiedbindings, ens.
Yaohai Bio-Pharma bied peptiedkartering-analisedienste vir jou teikenproteïen deur LC-MS, om jou navorsing oor proteïenstruktuur te bespoedig.
Ons was betrokke by die proteïenstrukturele karakterisering van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, nanoliggame/VHHs/ enkeldomein-teenliggaampies (sdAbs), teenliggaamfragmente, hormone/peptiede, sitokiene, groeifaktore (GF), ensieme, kollagene, ens.
Regulatoriese vereistes vir Peptiedkartering
ICHQ6B-riglyn beveel aan, "Selektiewe fragmentasie van die produk in afsonderlike peptiede word uitgevoer met behulp van geskikte ensieme of chemikalieë en die resulterende peptiedfragmente word deur HPLC of ander toepaslike analitiese prosedure ontleed. Peptiedfragmente moet so ver moontlik geïdentifiseer word deur tegnieke soos aminosuursamestellingsanalise, N-terminale volgordebepaling of massaspektrometrie (MS) te gebruik. Peptiedkartering van die aktiewe stof of geneesmiddelproduk (DP) deur gebruik te maak van 'n toepaslik bekragtigde metode is 'n metode wat dikwels gebruik word om die gewenste produkstruktuur vir bondelvrystelling te bevestig."
Analitiese metodes
| Analise |
Metodes |
| Peptied kartering |
Proteasevertering en vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS) |
Analitiese prosedure
1. Reduksie en Alkylering
Die doel is om disulfiedbrûe te verminder en die gegenereerde vrye tiol te blokkeer. Vermindering van disulfiedbrûe help om die proteïenstruktuur oop te maak wat die proteolitiese vertering doeltreffender maak. Hierdie stap sal ook die brûe tussen die kettings breek in die geval van meerkettingproteïene wat disulfiedbrûe het wat die kettings verbind (bv. monoklonale teenliggaampies, mAbs).
2. Vertering van die proteïen met behulp van ensieme
Die doel is om die proteïen in peptiede af te breek. Ons het die ensieme gekies op grond van die teoretiese volgorde van die proteïen en die kennis van teoretiese vertering van die proteïen deur ensieme. Die keuse van ensieme op hierdie manier, daar moet lei tot die beste peptied kartering analise.
3. Ontleding van die verteerde peptides Gebruik aanlyn omgekeerde fase-hoëprestasie-vloeistofchromatografie met ultraviolet (UV) en elektrosproei-massaspektrometriese opsporing (LC/ES-MS).
Peptiedskeiding gebaseer op polariteit met behulp van LC (omgekeerde fase-LC)
Soos die peptied uit die LC-kolom elueer, sal die massaspektrometer massa-inligting saam met fragmentiooninligting genereer, wat ons in staat stel om die volgorde-inligting te bepaal. Ons gebruik die volgorde-inligting om peptied-identiteit te bevestig en primêre inligting te verskaf.
Ons kan ook die fragmentasie-inligting vanaf die peptiede genereer soos hulle die massaspektrometerbron vanaf die LC-kolom binnegaan. Afhangende van die vereistes van die studie, is dit óf selektiewe LC-MS/MS óf nie-selektief, wat as 'n vorm van tandem MS beskou kan word.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
