Circular RNAs (circRNAs) is vir die eerste keer in 1979 as nie-koderende RNAs ontdek; dit was egter pas in 2015 dat getranskribeerde circRNAs in Drosophila gevind is, wat gelei het tot die studie van in vitro circRNAs vir terapeutiese en preventiewe doeleindes.
circRNAs brei self uit en het dus nie 'n konvensionele struktuur soos 'n 5' kap of 3' polyA staart nie. Hierdie struktuur maak hulle meer stabiel en weerstandig teen exonuklease soos RNase R.
Struktuurelemente van Circular RNA (circRNA)
Die templaat-DNA vir circRNA-sintese sluit gewoonlik in 'n interne ribosome-ingangstydperk (IRES), 'n oop leesraam (ORF) en ander wat krities is vir in vitro sirkulasie. Byvoorbeeld, ons het 'n plasmid ontwerp as in vitro transkripsie (IVT)-templaat, wat bestaan uit homologie-arme, 3' intron, 3' ekson, IRES, ORF, 5' ekson en 5' intron, om circRNA deur self-splicing-metodes voor te berei.
Die Interne Ribosoom Ingangsteken (IRES) speel belangrike rolle in die vertaling van cirRNAs. Encephalomyocarditis-virus (EMCV) IRES, coxsackievirus B3 (CVB3) IRES, menslike rhinovirus B3 (HRV-B3) IRES en ander IRES is algemeen gebruik vir die vertaling van die in vitro sintese van cirRNAs.
In vivo siklising van circRNA-lineêre voorgangers verskaf 'n belangrike stap in circRNA-sintese, gewoonlik deur chemiese, enzymatiese en ribosoom-gemediate self-replikasie-padweë. Bekend as 'n mijlpaal in die veld, is die chemiese metode vir circRNA-produksie, wat in 1988 begin het, vandag nie meer gebruik nie weens sy hoë koste, lae opbrengs, hoë aantal byprodukte, en die feit dat dit slegs geskik is vir die siklising van RNAs tot 70 nukleotide lank.
Enzymatische metodes vir die siklising van RNA is gebaseer op bakteriofag T4 enzime of ribozyme soos T4 DNA ligase (T4 Dnl 1), T4 RNA ligase 1 (T4 Rnl 1), en T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl 2). Om sirkelvormige RNA te vorm deur T4 bakteriofag enzime, moet nukleosied monofosfaat by die 5' einde geleë word en aan die OH groep by die 3' einde van die RNA gekoppel word. Aangesien nukleosied trifosfaat tydens die reaksie bygevoeg word, bevat IVT RNA guanosyn trifosfaat (GTP) by die 5’ einde.
Ribozyme is RNA volgordes wat self-splicing bevorder deur lineêre RNA molekulê te konverteer na circRNA sonder die behoefte aan addisionele enzime. Die self-vergaderingsproses behels twee opeenvolgende transesterifikasie-reaksies by spesifieke plekke om seker te stel dat die gewenste cirRNA produkte gevorm word. Die groep I intron self-splicing metode, ook bekend as PIE (intron en ekson inkapseling), wat die produksie van cirRNAs langer as 5 kb toelaat, is wydverspreid bestudeer en bewys waardevol.
Toepassing van Sirkulêre RNA (circRNA)
CircRNA Vakseen
Soos lineêre mRNAs, kan circRNAs in doelwitcells omgeskakel word in sekere proteïne en 'n sterk humorele en selmatige immuniteit uitloos. Onlangs het sommige navorsingsteams suksesvol circRNA-vaksene ontwikkel om COVID-19 te voorkom. Hul resultate het nie net die voordele van lineêre mRNA-vaksene gehad nie, maar ook 'n beter stabiliteit en langer duur van proteïen-uitdrukking as lineêre mRNA getoon. Daarom kan circRNA-vaksene voldoende immuunreaksies selfs by lae doses aanwakker.
Boonop dink sommige navysers dat circRNA-vaksene, as volgende generasie mRNAs, toekomstig effektiewe gereedskappe kan word om algemene virale/bakteriële siektes en groot opkomende infeksieuse siektes te bestreef, sowel as vir die behandeling van kanker en ander siektes.
CircRNA in CAR/TCR-T Terapie
As 'n pionier in die veld van rond RNA, het ORNA ontwikkelings ingestel vir in situ kimeriese antigenreseptor (CAR) terapie vir in situ terapie wat gebruik maak van ORN-101, 'n LNP-verpakte rond RNA, om immunuselle by pasiënte te modulasie. ORN-101 wys hoë uitdrukking van die CAR aangetrek deur 'n geoptimaliseerde IRES-element. In diermodelle is bewys dat ORN-101 tumeursupressie en vernietiging kan veroorsaak, wat suggereer dat ORN-101-gebaseerde antikankerterapies konvensionele CAR-T-sel terapie kan belemmer.
Boonop het Zhang et al. die lewensvatbaarheid en terapeutiese effektiwiteit van circRNAs in antigenspesifieke T-selreseptor (TCR)-T terapies geëvalueer. Hulle het 'n circRNA ontwerp wat pp65-TCR-T koddeer wat op die pp65-epitop van sitomegalievirus (CMV) gemik is. Boonop is bewys dat pp65-TCR meer as 7 dae op primêre T-selle uitgedruk word. Boonop het circRNA-pp65-TCR-T-selle spesifiek en konsekwent pp65- en HLA-uitdrukkende tumoruselle vermoor en beduidend die oorleweringstyd van muise verleng.
Daar is ook gewys dat selles wat met pp65 circRNA getransfekteer is, beter immuunresponse getoon het in vergelyking met lineêre mRNA.
Yaohai se Bio-Pharma Een-Stap CRDMO Oplossing vir Lange-Koderende RNA
|
Katalog RNA produkte
- Katalog mRNA Produkte
- Katalog saRNA Produktes
- Katalog circRNA Produktes
|
Aangepaste RNA Sintese
- Aangepaste mRNA Sintese
- Aangepaste saRNA-sintese
- Aangepaste circRNA-sintese
|
mRNA CDMO dienste
- Prosesontwikkeling
- GMP Vervaardiging
- Asptiese invulling en afronding
- Analise en Toetsing
|
AF
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
MS
BE
MK
UR
BN
