Sirkulêre mRNA (circRNA) is wyd gebruik in die studie van geen- of proteïenfunksies. Intussen is dit gewild in die ontwikkeling van profilaktiese en terapeutiese biologiese middels, soortgelyk aan mRNA.
Yaohai Bio-Pharma het 'n stel circRNA-sintesetegnologieë gevestig om hoëgehalte-RNA te verskaf, soos volgorde-ontwerp en -optimalisering, in vitro-transkripsie (IVT), sirkulasie/sirkulasie, suiwering en lipied-nanopartikel (LNP) inkapseling. Alle produkte word vrygestel onder die streng gehaltebeheer (QC) standaarde.
In vergelyking met lineêre mRNA, is sirkelvormige RNA (sirkulêre RNA) meer stabiel in struktuur en is dit 'n groot brandpunt in huidige nukleïensuurgeneesmiddelnavorsing. Dit het 'n wye reeks toepassings in verskillende velde, hetsy as koderende sirRNA of nie-koderende sirRNA, insluitend profilaktiese entstowwe vir aansteeklike siektes, terapeutiese onkologie-entstowwe, terapeutiese onkologiese middels, proteïenvervangingsterapie, regeneratiewe medisyne, sel- en geenterapie (KWB) , molekulêre sponsrol en RNA-aptameer.
proses | Opsionele diens | Diensbesonderhede | Afleweringstydperk (dag) |
circRNA-volgorde-ontwerp en -optimalisering | Ontwerp en optimering van koderingreekse | CDS-kodonoptimalisering | 1 |
Ontwerp en optimalisering van nie-koderende reekse | Intron- en eksonvolgorde, homoloë arm en spasieerderontwerp en optimalisering | 1-2 | |
Omsendbrief Plasmied Voorbereiding | Genesintese | Genesintese (Derdeparty) | 7-10 |
Plasmiedversterking | Plasmiedversterking | 2 | |
Plasmied onttrekking | |||
Gelineariseerde Plasmied Voorbereiding | Plasmied linearisering en suiwering | Plasmied linearisering | 1 |
Linearisering DNA Suiwering | |||
In vitro-transkripsie en siklisering | In vitro-transkripsie en siklisering | In vitro-transkripsie en sikliseringsreaksies | 1-2 |
RNase R Vertering | |||
Optimering-opsioneel | Reaksiesamestelling, tydoptimalisering | 2-5 | |
circRNA Suiwering | Konvensionele suiweringsmetode | Litiumchloried neerslag | 1 |
Magnetiese kraal suiwering | 1 | ||
Hoogs suiwer circRNA-suiwering | Voorbereidende hoëprestasie vloeistofchromatografie (HPLC) | 1-2 | |
Bufferruil | ultrafiltrasie | 1 | |
circRNA Lyofilisering | Monstervulsel | Vulsel | 2-3 |
Lyofilisasie | Voorvries | ||
Primêre droging (sublimasie) | |||
Sekondêre droging (desorpsie) | |||
circRNA-LNP Encapsulation | LNP Encapsulation | Materiaal en vloeibare voorbehandeling | 2 |
Mikrofluïdiese toestelmengsel | |||
Bufferruil | Tangensiële vloeifiltrering | 1 | |
gesteriliseer | Filtration | ||
Gehaltebeheer van Plasmied DNA | Konsentrasie/suiwerheid | Ultraviolet (UV) Spektrofotometrie | 1-2 |
Plasmied konformasie | Agarose Gel Elektroforese (AGE) | ||
Kapillêre Elektroforese (CE) - Opsioneel | |||
Plasmied identifiseer | Beperking Ensiem Identifikasie/OUDERDOM | ||
Gehaltebeheer van circRNA | Konsentrasie/suiwerheid | Ultraviolet (UV) Spektrofotometrie | - |
Purity | Agarose Gel Elektroforese (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-opsioneel | 1 | ||
Gehaltebeheer van circRNA-LNP | Inkapselingsdoeltreffendheid | RiboGreen Metode | 1 |
Deeltjiegrootte | Dinamiese ligverstrooiing (DLS) | 1 | |
Polidispersiteitsindeks | Dinamiese ligverstrooiing (DLS) | 1 | |
Zeta-potensiaal | Dinamiese ligverstrooiing (DLS) | 1 | |
Selgebaseerde sterktetoets | Seltransfeksie | Selplatering, seltransfeksie | 4 |
Teikenproteïenopsporing | Fluoresentasie waarneming, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Ons het verbeterde groen fluoresserende proteïen circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA in 293T-selle getransfekteer, en teikenproteïen opgespoor deur fluoressensie, luminescerende of kleursein, westelike klad (WB), ensiemgekoppelde immunosorberende toets (ELISA).
Sel-gebaseerde sterktetoetse van circRNA-monsters deur Yaohai Bio-Pharma