5'-eindafdekking is 'n noodsaaklike modifikasie van mRNA. mRNAs met cap strukture, veral Cap1 strukture, fasiliteer mRNAs ontduik aangebore immuunresponse in vivo, wat lei tot doeltreffende proteïen translasie.
Ensiematiese kapping (die tweestapmetode) is die konvensionele metode van mRNA-bedekking, soortgelyk aan die kappingsproses in eukariotiese organismes. Onder die werking van 'n reeks ensieme word 7-metielguanien (m7G) aan die 5'-kant van mRNA gekoppel deur 'n 5'-5' trifosfaatbinding en ondergaan metileringsmodifikasie om die kapstruktuur Cap 1 (m7GpppN) te vorm.
Diagram van natuurlike kapstruktuurvorming
Die ensiematiese kappingsreaksievloei is soos volg:
Gelineariseerde plasmied DNA word gebruik as 'n sjabloon vir in vitro transkripsie (IVT) in die teenwoordigheid van T7 polimerase, en mRNA met 'n 5' eindkap struktuur word gevorm na 'n eenstap suiwering met behulp van die vaccinia capping ensiem en 2'-O -metieltransferase.
Dienste Besonderhede
Opsionele diens |
Diensbesonderhede |
Afleweringstydperk (dag) |
mRNA ensiematiese kapping |
Ensiematiese kapingsreaksie |
1 |
Beperkingsreaksie-optimering - opsioneel |
Reaksie komponent ontwerp en optimalisering |
3 ~ 7 |
Ons funksies
- Ontwerp en optimering van die kapreaksiekomponent
Die kappingsreaksiekomponent is geoptimaliseer, en die produksie van mRNA-transkripsie word aansienlik verhoog.
- In vitro uitdrukking verifikasie
Die bedekte mRNA word in 293T-selle getransfekteer, en die uitdrukking van die teikenproteïen kan opgespoor word.
Deur streng beheer van die RNaseson eksperimentele omgewing en verbruiksgoedere, word mRNA-afbraak effektief voorkom.
Gevallestudie
Yaohai Bio-Pharma se mRNA-platform het 'n perfekte afdekkingsreaksieproses gebou.
Vir eGFP-mRNA, 'n mRNA-voorproduk wat deur ensiematiese kaping voorberei is, kan 'n eGFP-fluoressensiesein (groen fluoressensie) op 'n hoë vlak waargeneem word na transfektering van 293T-selle vir 24 uur, wat deur Western Blot (WB) opgespoor word, wat demonstreer dat die teikenproteïen verbeterde groen fluoresserende proteïen (eGFP) kan doeltreffend in vitro uitgedruk word.
Uitdrukking van Ensiematiese Capped eGFP mRNA in 293T Sel
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
