kapping aan die 5'-ein van mRNA is 'n noodsaaklike modifikasie van mRNA. mRNAs met kapstrukture, veral Cap1-strukture, help mRNAs om innegte immuneresponse in vivo te ontwrig, wat lei tot doeltreffende proteïenversetting.
Enzymatiese kapping (die twee-stappe-metode) is die konvensionele metode van mRNA-kapping, soortgelyk aan die kapproses in eukariotiese organisme. Deur 'n reeks enzime, word 7-methylguanien (m7G) aan die 5'-ein van mRNA deur 'n 5'-5' trifosfaatbinding gekoppel en ondergaan methylasie-modifikasie om die kapstruktuur Cap 1 (m7GpppN) te vorm.
Diagram van natuurlike kapstruktuurbilding
Die enzymatiese kappingsreaksiestroom is as volg:
Lineêre plasmid-DNA word as sjabloon gebruik vir transkripsie in vitro (IVT) in die teenwoordigheid van T7-polymerase, en mRNA met 'n 5' einde-kapstruktuur word gevorm na 'n eenstappe verfyningsproses met behulp van die vaccinia-kappingselement en 2'-O-metiltransferase.
Dienste Details
Opsionele Diens |
Diensbesonderhede |
Levertydperk (Dag) |
mRNA Enzimatiese Afsluiting |
Enzymatiese kappingsreaksie |
1 |
Optimalisering van kappingsreaksie - opsioneel |
ReaksiekompONENTontwerp en optimering |
3~7 |
Ons kenmerke
- Ontwerp en optimalisering van die kappingsreaksiekomponent
Die kappingsreaksiekomponent word geoptimaliseer, en die produksie van mRNA-transkripte word drasties verhoog.
- Verifikasie van in vitro-uitdrukking
Die gemaskerde mRNA word getransfereer in 293T-selle, en die uitdrukking van die teikenprotein kan opgespoor word.
Deur streng beheer van die RNases in die eksperimentele omgewing en verbruiksgoederes, word mRNA-verval doeltreffend voorkom.
Gevallestudie
Yaohai Bio-Pharma se mRNA-platform het 'n perfekte maskeringsreaksieproses ontwikkel.
Voor eGFP mRNA, 'n mRNA-preprodukt voorberei deur enzymatiese maskering, kan 'n eGFP fluoresensiesignaal (groen fluoresensie) op hoë vlak waargeneem word na transaksie van 293T-selle vir 24 ure, wat deur Western Blot (WB) opgespoor word, wat aantoon dat die teikenprotein, versterkte groen fluoreserende protein (eGFP), doeltreffend in vitro uitgedruk kan word.
Uitdrukking van Enzymaties Geëndigde eGFP mRNA in 293T-sel
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
