Wat die massaproduksie van mRNA betref, is in vitro transkripsie (IVT) 'n meer doeltreffende en volwasse metode. Die IVT-reaksie neem gelineariseerde plasmied-DNA aan wat die T7-promotor as 'n templaat bevat, en mRNA word gesintetiseer met nukleosiedtrifosfate (NTP's) as substrate in die teenwoordigheid van T7-RNA-polimerase.
Nukleotiedmodifikasie is 'n deurbraak in die verkenning van mRNA, waar ongemodifiseerde mRNA-molekules deur intrasellulêre RNA-sensors herken word om aangebore immuniteit te aktiveer. Vir oorwegings van mRNA in vivo immunogenisiteit en translasiedoeltreffendheid, gebruik die IVT-proses gewoonlik sekere soorte gemodifiseerde NTP's, en algemene gemodifiseerde nukleotiede is pseudouridien (Ψ), N1-metiel-pseudouridien (N1Ψ), en 5-metielsitosien (5mC).
In vitro transkripsieproses van mRNA
In vitro transkripsie (IVT) reaksiediagram
Dienste Besonderhede
Opsionele diens |
Diensbesonderhede |
Afleweringstydperk (werksdag) |
In vitro transkripsie (IVT) |
IVT, In vitro transkripsie |
1 |
| Nukleotiedmodifikasies (Ψ/N1Ψ/5mC, ens.) |
| DNA-sjabloonverwydering (DNase I) |
IVT toestand optimalisering - opsioneel |
IVT reaksie komponente ontwerp en optimalisering |
2-5 |
Ons funksies
- Gediversifiseerde Nukleotied Modifikasie Strategieë
Verbeter mRNA-stabiliteit en proteïenuitdrukking in vivo.
- Streng toetsontwerp en optimalisering
mRNA fragment voorbereiding tot 10kb kan bereik word.
- Doeltreffende transkripsie
Deur IVT-reaksietoestande te optimaliseer, is die transkripsietempo tot 1:200.
Streng beheer van RNase deur 'n eksperimentele omgewing en verbruiksgoedere kan mRNA-afbraak effektief voorkom.
Gevallestudie
Die huidige IVT-reaksiestelsel is rofweg geoptimaliseer vir sintetiese stelsels met 'n lengte van ongeveer 100 nt, nie vir mRNA's van arbitrêre lengte nie. Hoe langer die mRNA-volgorde, hoe moeiliker is dit om te transkribeer en hoe meer geneig is dit tot agteruitgang.
Ten einde pasgemaakte mRNA-volgordes met 'n lengte van ongeveer 10 kb voor te berei, het Yaohai Bio-Pharma suksesvol monsters van hoë gehalte met 'n hoë transkripsieverhouding van 1:135 voorberei en 135 μg aanvanklik gesuiwerde mRNA-produkte verkry na 1 μg gelineariseerde plasmied is in vitro getranskribeer deur streng eksperimentele ontwerp, deurlopende optimalisering van reaksietoestande en streng beheer van RNase.
mRNA Identifiseer (Agarose Gel Elektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
