In die voorbereidingsproses van in vitro transkripsie (IVT) mRNA word 'n lineêre plasmid DNA vereis as die transkripsievoorbeeld vir IVT met die hulp van T7 RNA-polimerase. Hoë-kwaliteit plasmid DNA is krities vir in vitro transkripsie.
Op grond van die volwasse plasmidvoorbeeldvoorbereidingsdienstplatform kan Yaohai Bio-Pharma 'n hoë-reinheid en hoë-standaard lineêre plasmid DNA-voorbeeldvoorbereidingsdienst aanbied om doeltreffende IVT-transkripsie te bereik.
Proses | Opsionele Diens | Diensbesonderhede | Leveringstydperk (werkdaag) |
Sirkulêre Plasmiedbereiding | Geensintese | Genusynthese (Derde party) | 7-10 |
Plasmidversterking | Plasmidversterking | 2 | |
Plasmidextractie | |||
Lineêre Plasmidvoorbereiding | Plasmidlinearisering en -reiniging | Plasmid-linearisering | 1 |
Linearisering van DNA-reiniging | |||
Plasmid DNA kwaliteit beheer | Konsentrasie en reinheid | Ultraviolette (UV) Spektrofotometrie | 1-2 |
Plasmidkonformasie | Agarose Gel Elektrofose (AGE) | ||
Kapillaire Elektroforesis (CE)-Opsioneel | |||
Plasmididentifisering | Beperkingsenoomidentifisering / AGE |
Vloekse seleksie van lineariseringmetodes
Optimalisering van DNA-onttrekings- en zuiveringmetodes om hoë herwinningstempo's te bereik.
Streng prosesbeheerstandaarde, met 'n superhelikale konformasiekoers van plasmidmonsters vir navorsing van meer as 80%.
Hoë standaard en hoë doeltreffendheid plasmidvoorbereiding en kwaliteitsbeheersdienste om eksperimentele behoeftes te voldoen.
Deur die Yaohai Bio-Pharma-katalog mRNA_luciferase-produk as voorbeeld te neem, het die transkripsietemplaatplasmidmonster (navorsingsgraad) 'n superhelikale verhouding van meer as 90%, 'n lineariseringsverhouding wat byna 100% is, en 'n volgende transkripsieverhouding van tot 1:200 (lineariseerde plasmid-DNA:mRNA).
Die mRNA_luciferase wat deur die voorbereiding van 'n lineariseerde plasmid as templaat verkry is, word in 293T-selle transfekteer, en word die ensiem-substraatreaktiesaktiwiteit 24 uur na transfeksie geëvalueer.
'n Duidelike sterk luciferase-aktiwiteitsignaal kan opgespoor word, d.w.s. die luciferase-proteïen word doeltreffend uitgedruk, wat suggereer dat die reinheid van die transkripsie-sjabloon volkome voldoen aan die vereiste van hoë-kwaliteit mRNA voorbereiding.
Verhoudingstoets van Supercoiled Plasmid
Validering van luciferase mRNA-uitdrukking In Vitro