Sel-gebaseerde sterktetoetse
Die belangrikheid van mRNA-kragtoets
Met die vinnige ontwikkeling van mRNA-entstowwe en terapeutiese middels, is 'n spesifieke paneel van ontledingsmetodes nodig om die sterkte te toets (om hul biologiese aktiwiteit te definieer), wat die translasiedoeltreffendheid van mRNA behels. Hierdie metodes is tipies gebaseer op seltransfeksie en funksionele toetse van die teikenproteïen.
Yaohai Bio-Pharma bied selgebaseerde sterktetoetse vir mRNA-middelstowwe of LNP-produkte, insluitend seltransfeksie (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 selle, ens.) en ELISA of Western Blotting (WB) toetse.
Regulatoriese vereistes vir sterktetoetse
Volgens die WGO se regulatoriese oorwegings, "moet die sterkte van elke lot van die finale entstof bepaal word met behulp van 'n toepaslike kwantitatiewe en bekragtigde funksionele metode(s). Potensiële in vitro sterktetoetse kan selgebaseerde transfeksiesisteme of selvrye toetse insluit.” En die USP het 'n "selgebaseerde toets" aanbeveel om die sterkte van mRNA te toets, dws uitdrukking van die teikenproteïen.
Analitiese metode
|
Analise
|
Metodes
|
|
Kragtoetse
|
Selgebaseerde transfeksie en teikenproteïen identifiseer:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 selle, ens.
|
Prosedure
Stap 1. Sel-gebaseerde Transfeksie met mRNA of mRNA-LNP
Die selle word gekweek en getransfekteer met mRNA of mRNA-LNP. In besonderhede word mRNA getransfekteer nadat dit met 'n transfeksiereagens gemeng is, terwyl mRNA-LNP direk in die selle getransfekteer word. Na 24-48 uur, verhelder die supernatant wat die uitgedrukte proteïen bevat deur sentrifugering.
Stap 2. Funksionele toetse van die teikenproteïen
Voer ELISA- of WB-toetse uit om die funksionele binding van die teikenproteïene te bepaal.
Gevallestudie
Selgebaseerde sterktetoetse van mRNA-monsters
Yaohai-BioPharma het selgebaseerde sterktetoetsmetode vir mRNA ontwikkel, wat selkultuur, seltransfeksie en proteïenfunksionele toetse behels. Ons het eGFP-mRNA, mCherry-mRNA, luciferase-mRNA, piekproteïen-mRNA in 293T-selle getransfekteer, en teikenproteïen opgespoor deur fluoressensie, luminescerende of gekleurde sein, WB, ELISA.
Selgebaseerde sterktetoetse van mRNA-produkte deur Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
