Rekombinante proteïene sien dikwels die oxidering van blootgestelde aminozuurseitekettings, soos tryptofaan (Trp) en metionien (Met), wat die fisiekemiese eienskappe van proteïene verander. Hierdie veranderinge kan op hul beurt bydra tot die verandering van die biologiese funksies van die betrokke proteïene, soos verlies van binding, verminderde enzymaktiwiteit, onverwag vinnige uitstoting. Proteïene is belangrike doelewitte vir oksideringsreaksies omdat hulle vinnig reageer met oksidante en in hoë konsentrasies in selles, ekstrasellulêre weefsels en liggamevloeistowwe aanwesig is.
Daarom is die toepassing van proteïen-oksidering krities vir suksesvolle biotekenontwikkeling.
Yaohai Bio-Pharma bied 'n diens vir die analise van aminozuur-oksidering, wat u in staat stel om die aminozuur-oksidering deur Vloeistofkromatografie-Massaspectrometrie (LC-MS) te bepaal.
Ons het betrokke geweest by die Proteïenstrukturele Karakterisering van verskeie groot molekulê, insluitend Herkombinerde Subeenheidvaksine, Nanoliggame/VHH's/Enkel-domein antiliggame (sdAbs), Antiliggamafswartings, Hormone/Peptide, Sitokine, Groei Faktore (GF), Ensimme, Kollagene, ens.
Reguleringsvereistes vir Aminosuur Oksidasie
Volgens die ICH Q6B riglyne kan oksigeerde vorme opgespoor en gekarakteriseer word deur kromatografiese, elektrofoetiese en/of ander toepaslike analitiese metodes (bv. Hoë Verrigting Vloeistofkromatografie (HPLC), kapillêre elektrofoese, massaspectroskopie, sirkulaire dichroïsmus).
Analitiese Metodes
| Analise |
Metodes |
| Aminosuur Oksidasie |
LC-MS, Terugwaardige Fase Hoë Verrigting Vloeistofkromatografie (RP-HPLC) of Hidrofoob Interaksie Kromatografie Hoë Verrigting Vloeistofkromatografie (HIC-HPLC) en massaspectroskopie |
Analitiese Prosedures
1. Steekproefvoorbereiding
2. LC-MS
3. Data-analise
Tryptofaan (Trp) residuë is veral vatbaar vir oksidasie weens die hoë reactiviteit van die aromatiese indool met reaktiewe suurstofspesies. Trp-oksidasie vereis 'n mate van blootstelling van Trp-residuë wat gewoonlik ingegrif is in die drie-dimensionele struktuur van die proteïen.
Toegewys, wanneer Trp-residuë oksideer, kan hulle omvorm tot 'n verskeidenheid produkte met baie verskillende eienskappe as die oorspronklike Trp. Die mees algemene pad vir Trp-oksidasie sluit die vorming van N-formylkinureniin in (Massaverskil: +32).
Nog 'n ander aminezuur wat gemaklik oksideer is metionien. Die swawelatoom in die Met-residu kan óf een óf twee suurstofatome aanneem, wat lei tot die vorming van sulfoxied (Massaverskil: +16) of sulfon (Massaverskil: +32), ooreenkomstig. Hierdie modifikasie is relatief algemeen weens die tipies hoë oppervlaktesblootstelling van Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
